不同处理对猪前顶体蛋白活性及降解的影响

摘要

本试验的主要目的是研究猪精子在4℃下不同平衡时间（20、40、60、80、100min），为猪精液冷冻筛选最佳的平衡时间；向冷冻稀释液中分别添加2％、4%、6%、8%浓度的甘油，为冷冻保护剂筛选最佳甘油浓度。评估不同处理对精子顶体酵素活性的影响。向精液中分别添加咖啡因与维生素E，筛选出最佳冷冻保护剂添加物，进一步优化冻融猪精子的质量。利用SDS-PAGE方法，分析冻融猪精子前顶体蛋白的转化过程。结果表明：
　　1、4℃下平衡的猪精子，以冷却平衡60min的猪精子质量明显高于其它温度平衡的平衡时间（P<0.05），精子质量此时最高，精子活为33.75％，顶体完整率为34.25％，低渗膨胀率为31.50％。而且，各个处理组精子质量均明显高于对照组，因此可以看出在4℃条件下平衡对精子冷冻过程非常重要。甘油2%和4%浓度处理组中，冻融猪精子的质量明显高于对照组和其它浓度组（P<0.05），可见甘油2%和4%的浓度处理在冻融过程中能够更好的保护精子，提高精子质量，从而提高冻融精子的实际利用价值。
　　2、鲜精、稀释精液（l:1）和液相精液（17℃）的精子顶体酵素活性分别是5.27,4.28和4.41(mUI/106）。精子在37℃培养条件下精子顶体酵素的活性有上升的趋势，建议最佳的受精温度是25℃～37℃。
　　3、分别将以5mg/mL咖啡因和200mg/ml维生素E作为冷冻保护剂的冻融精子与新鲜精子进行SDS-PAGE分析比较。添加咖啡因和维生素E作为冷冻保护剂的冻融精子比无咖啡因的冻融精子样本条带少，因此与新鲜精子相比更相似。结果说明，咖啡因和维生素E都能阻止个别蛋白提前转化，两者比较咖啡因效果更明显。

目录

声明

第一章 前言

1.1 冷冻保存猪精液的原理

1.2 猪精液冷冻效果的影响因素

1.2.1 冷冻稀释液和保护液对精子冷冻的影响

1.2.2 冷冻解冻方法的影响

1.3 猪精子冷冻解冻后的变化

1.4 本试验研究的目的和意义

第二章 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 时间和地点

2.1.2 实验动物

2.1.3 主要药品

2.1.4 主要仪器

2.2 实验方法

2.2.1.药品的配制

2.2.2 实验内容

2.2.3 统计分析

第三章 结果与分析

3.1 不同冷冻条件对冻融猪精液质量参数的影响

3.1.1 4℃条件下平衡时间对精子质量的影响

3.1.2 不同甘油浓度对精子质量的影响

3.2 不同处理对猪精子顶体酵素活性的影响

3.2.1 不同处理对精子顶体酵素活性的影响

3.2.2 培养温度对不同种类精液精子顶体酵素活性的影响

3.3 SDS-PAGE 分析不同抗氧化剂对精子蛋白转化的影响

3.3.1 咖啡因对冻融精子蛋白转化的影响

3.3.2 维生素 E 对冻融精子蛋白转化的影响

第四章 讨 论

4.1 冻融过程中不同处理对猪精子质量的影响

4.2 不同条件下猪精子顶体酵素活性的影响

4.3冻融过程中不同抗氧化剂对精子蛋白的保护作用

第五章 结 论

参考文献