衍生化法测定蚯蚓、山药中巯基化合物的研究

摘要

巯基化合物广泛存在于生物体内，在生物体内扮演者重要的角色。巯基化合物具有抗氧化﹑延缓衰老﹑重金属解毒﹑清除自由基等活性功能。巯基化合物的巯基会在提取过程中受胞外环境的影响，容易使巯基氧化，而导致巯基化合物的测定结果不准确，甚至漏检。近年来，生物样品中巯基化合物提取液的测定，大部分经过细胞破壁、衍生化、除蛋白等前处理过程。本研究以三种不同前处理方法对巯基化合物的测定进行了探讨，其细胞破壁与衍生化为一体的同步衍生化法提取得到的样品提取液的灵敏度最高。采用细胞破壁与衍生化为同步提取方法，得到准确的巯基化合物的含量信息。利用UV-Vis紫外分光光度法和高效液相色谱法测定蚯蚓中GSH﹑Cys和总巯基的含量，此外光谱法测定山药中总巯基和GSH含量。
　　第一章绪论简单介绍巯基化合物研究概况与巯基化合物的分析方法，提出本论文的选题思想和本课题的主要研究内容。
　　第二章5,5`-二硫硝基苯甲酸衍生化法测定蚯蚓中巯基化合物的含量
　　利用衍生化试剂5,5`-二硫硝基苯甲酸（DTNB），采用UV-Vis紫外分光光度法测定蚯蚓中的总巯基含量以及高效液相色谱法选择性的测定GSH﹑Cys。GSH、Cys和总巯基含量分别为0.6268μmol/g、0.8511μmol/g和4.5087μmol/g。根据实验数据，蚯蚓中含有相对较高的Cys含量，说明蚯蚓具有很高的同化代谢土壤中硫的能力并使其转换成Cys,为GSH和MTs生物合成提供充足的含巯基氨基酸源。
　　第三章光谱法测定蚯蚓中总巯基和GSH的含量
　　本研究利用4,4`-二硫代联吡啶(4-DPS)和邻苯二甲醛(OPA)衍生化试剂，光谱法测定蚯蚓中总巯基和GSH含量。从实验结果，蚯蚓中富含GSH和巯基化合物，可知蚯蚓体内的含巯基化合物对重金属具有强的配位作用，这为利用蚯蚓生物修复重金属污染提供了重要的化学依据。
　　第四章衍生化法测定山药中的谷胱甘肽和总巯基的含量
　　利用4,4`-二硫代联吡啶(4-DPS)和邻苯二甲醛(OPA)为衍生化试剂，采用三种不同前处理方法，分别用UV-vis分光光度法和荧光光谱法测定了山药中总巯基(-SH)、GSH的含量。发现山药中富含巯基化合物，同步衍生化光谱法测定总巯基和GSH含量为0.4343~0.4556μmol/g，0.1649~0.1711μmol/g。方法的检测线和回收率也达到灵敏和准确测定的要求。

目录

声明

第一章 绪 论

1.1巯基化合物的研究概况

1.1.2 巯基化合物的性质、分布及作用

1.1.3 巯基化合物在生物体内的生物学功能

1.2 巯基化合物的分析方法

1.3.1 选题思想

1.3.2 研究内容

第二章 5,5`-二硫硝基苯甲酸衍生化法测定蚯蚓中巯基化合物的含量

2.1引 言

2.2 实验部分

2.2.1 仪器和试剂

2.2.2色谱条件

2.2.3 实验方法

2.3 结果和讨论

2.3.1 HPLC法测定GSH和Cys检测器波长的选择

2.3.2 DTNB与巯基化合物衍生化反应的选择性

2.3.3样品前处理对测定的影响

2.3.4高效液相色谱法测定蚯蚓中GSH、Cys的含量

2.3.5 UV-Vis分光光度法测定蚯蚓中总巯基的含量

2.3.6 蚯蚓中GSH和Cys与总巯基含量、回收率、检测限

2.4 结论

第三章 光谱法测定蚯蚓中GSH和总巯基的含量

3.1引 言

3.2 实验部分

3.2.1 仪器和试剂

3.2.2 实验方法

3.3 结果和讨论

3.3.1生物样品前处理过程对结果的影响

3.3.2同步衍生化法测定蚯蚓中巯基和GSH的含量

3.4 结论

第四章 衍生化法测定山药中还原型谷胱甘肽和总巯基的含量

4.1引言

4.2实验部分

4.2.1 仪器和试剂

4.2.2 实验方法

4.2.3 数据处理

4.3 结果与讨论

4.3.1 样品前处理对测定的影响

4.3.2同步衍生化法测定山药提取液中总巯基和GSH含量

4.3 结 论

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文及其他成果

致谢