牛瑟氏泰勒虫二温式PCR快速检测技术的建立及初步应用

摘要

牛瑟氏泰勒虫（Theileriasergenti）主要寄生于牛红细胞、巨噬细胞以及牛淋巴细胞内。可引起的主要症状为高热、贫血、消瘦和体表淋巴结肿大。随着世界经济贸易的高速蓬勃发展，养牛业市场交易的日趋规模化，牛瑟氏泰勒虫病的流行区域范围不断扩大。近年来该病的发病率和死亡率呈上升趋势，给相关国家的养牛业带来了巨大的经济损失，已成为严重危害畜牧业健康发展的重要疾病之一。
　　目前，GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫的基因较多，其中P23表面蛋白基因可用于牛瑟氏泰勒虫的的诊断。为建立一种牛瑟氏泰勒虫快速检测技术，本试验根据GenBank上已发表的牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因序列（D84447）设计一对特异性引物，扩增出大小为244 bp的基因片段，经克隆、测序分析，与已知基因序列同源性为100％。经敏感性试验、特异性试验、重复性试验、对比试验，结果表明所建立的牛瑟氏泰勒虫二温式PCR能检测出的最高敏感度为171 fg/μL，不与牛新孢子虫、弓形虫RH株和卵形巴贝斯虫基因组DNA产生交叉反应，对80份临床血液样本进行检测，阳性检出率为67.50%。用同一对引物对60份临床血液样本分别进行二温式PCR和常规PCR检测，阳性符合率为97.56%，总符合率为98.33%。
　　本试验成功建立了牛瑟色泰勒虫二温式PCR诊断方法，该方法的主要优点为快速诊断、敏感性高、特异性强等，可用于牛瑟氏泰勒虫病的快速临床诊断，同时也用于该病的流行病学调查。

目录

声明

前言

1牛瑟氏泰勒虫病的基本概述

2牛瑟氏泰勒虫病流行病学方面的研究

3牛瑟氏泰勒虫病原学方面的研究进展

4牛瑟氏泰勒虫病诊断学方面的研究进展

5二温式PCR技术的发展

6牛瑟氏泰勒虫病的主要防治措施

7本研究的目的及意义

材料与方法

1 试验材料

2 试验方法

结果

1 PCR扩增

2二温式PCR反应体系的优化

3测序结果及序列分析

4特异性试验

5敏感性试验

6重复性试验

7对比试验

8血液样本检测

讨论

结论

参考文献

致谢

个 人 简 介

附录