大豆皂苷对d-半乳糖诱导衰老小鼠肾脏抗氧化作用的影响

摘要

目的：探讨大豆皂苷对D-gal诱导衰老小鼠肾脏的抗氧化作用影响。
　　方法：60只SPF昆明雄性小鼠，随机分为实验空白对照、D-gal模型组、大豆皂苷低剂量(SS25)组、大豆皂苷中剂量(SS50)组、大豆皂苷高剂量(SS100)组和维生素E(VE)组，每组10只。空白组外，其它各组每天在相同部位皮下注射D-gal溶液(300mg/kg)，不间断共7周。分别对SS25组、SS50组、SS100和VE组小鼠进行灌胃，剂量分别是25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、50mg/kg。眼球取血与杀鼠取肾脏。1.ELISA法对血清衰老指标8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)指标的检测；2.取部分肾组织进行病理学HE染色；3.部分肾组织匀浆后比色法进行氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)及NO、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的检测；4.试剂盒提取肾脏线粒体，对线粒体Na+K+ATPase、Ca2+Mg2+ATPase与氧化指标锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、丙二醛(MDA)进行检测;；5.蛋白印迹法对COX-2、HO-1重要治疗靶点表达进行检测。
　　结果：1、对小鼠血清的检测:与空白对照组比较，D-gal模型组8-OHdG水平明显升高（P＜0.05），与D-gal组比较，大豆皂苷各处理组8-OHdG含量明显降低(P＜0.05）;
　　2、肾组织HE染色结果:空白组，肾小球大小、形态正常，肾小管未见异常，未发现炎细胞浸润。与正常组相比，D-gal模型组肾小球萎缩，部分肾小管上皮细胞肿胀，管腔缩小;与D-gal模型组相比，SS25组肾小管上皮细胞肿胀明显，管腔明显缩小，堵塞，肾小球未见明显萎缩;SS50组有玻璃样变;而SS100组肾小管上皮细胞未见明显肿胀，管腔正常，肾小球大小、形态未见异常；
　　3、对小鼠肾脏组织氧化指标的检测:与空白对照组比较，D-gal组SOD、GSH-PX、CAT酶活性下降（P＜0.05），与D-gal模型组比较，大豆皂苷各剂量组SOD与SS100组GSH-PX、CAT酶活性明显升高(P＜0.05);与空白对照组比较，D-gal组MDA水平明显升高(P＜0.05），与D-gal组比较，大豆皂苷处理组MDA水平明显下降低(P＜0.05);与空白组比较，D-gal组NO水平增高显著(P＜0.05），与D-gal组比较，大豆皂苷处理后各剂量组NO水平显著降低(P＜0.05）;与空白组比较，D-gal模型组耐OS酶活显著增高(P＜0.05），与D-gal组比较，大豆皂苷各处理组iNOS酶活降低显著（P＜0.05）;
　　4、与空白对照组比较，D-gal组Na+K+ATPase、Ca2+Mg2+ATPase酶活性下降(P＜0.05)，与D-gal组比较，SS50、SS100组Na+K+ATPase与大豆皂苷处理组Ca2+Mg2+ATPase酶活性明显升高(P＜0.05）;与空白对照组比较，D-gal组MDA水平明显升高（P＜0.05），与D-gal组比较，SS100组MDA水平明显降低(P＜0.05);与空白对照组比较，D-gal组MnSOD酶活性下降(P＜0.05)，与D-gal组比较，SS100组MnSOD酶活性明显升高(P＜0.05）;
　　5、蛋白印迹法检测肾组织HO-1、COX-2蛋白表达，与空白对照组比较，D-gal模型组COX-2、HO-1表达明显升高（P＜0.05），与D-gal组比较，大豆皂苷处理组COX-2、HO-1表达明显降低（P＜0.05）;
　　结论：大豆皂苷对D-半乳糖所致衰老小鼠肾脏衰老有延缓作用;大豆皂苷能提高机体抗氧化能力的作用;大豆皂苷具有抗衰老的作用，其作用机制可能与提高机体抗氧化能力有关。

目录

声明

摘要

中英文缩略词

第一章 绪论

第二章 材料

2．1 实验动物

2．2 药品与试剂

2．3 抗体

2．4 主要仪器

第三章 方法

3．1 实验分组

3．2 样本处理

3．3小鼠血清中8-OHdG的含量检测

3．4 肾脏组织HE染色

3．5 小鼠肾脏中MDA含量和SOD、CAT、GSH-PX酶活力检测

3．6 小鼠肾脏线粒体各项指标检测

3．7 小鼠肾脏中NO、iNOS的检测

3．8 肾脏重要治疗靶蛋白HO-1、COX-2的表达

3．9 数据处理和统计分析

第四章 结果

4．1 衰老小鼠血清中衰老指标8-OHdG含量检测

4．2 衰老小鼠肾脏组织形态学的检测

4．3 衰老小鼠肾脏中MDA含量及SOD、CAT、GSH-PX酶活力的检测

4．4 衰老小鼠肾脏中线粒体各指标的检测

4．5 衰老小鼠肾脏中NO、iNOS的检测

4．6 衰老小鼠肾脏中HO-1蛋白表达

4．7 衰老小鼠肾脏中COX-2蛋白表达

第五章 讨论

第六章 结论

参考文献

致谢