五味子酚抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖的机理研究

摘要

目的:
　　研究五味子酚抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖的作用机理。研究五味子酚抗心肌纤维化的作用机制以及Connexin43、TGF-β1在其中的作用。
　　方法:
　　利用SD的乳鼠的心脏以0.1％Ⅱ型胶原蛋白酶采用酶消化法结合差速贴壁法获得纯化的心肌成纤维细胞;采用免疫荧光技术鉴定心肌成纤维细胞;利用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测五味子酚对心肌成纤维细胞增殖的影响;给予血管紧张Ⅱ及五味子酚药物干预后采用Western blot对Connexin43、TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量进行测定并进行数据分析。
　　结果:
　　①MTT实验结果显示AngⅡ组（浓度为10-7mol/L）与空白组比较具有显著差异，心肌成纤维细胞增殖明显(P＜0.01);在一定浓度范围内，五味子酚能明显抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞的增殖(P＜0.05或P＜0.01);
　　②Western blot实验结果显示AngⅡ组（浓度为10-7mol/L）时可以明显引起Connexin43蛋白表达量显著下降(P＜0.01)。在一定浓度范围内，五味子酚能明显上调Connexin43蛋白表达量并且具有一定的剂量依赖性（P＜0.05或P＜0.01）。
　　③AngⅡ组（浓度为10-7 mol/L）时可以明显引起Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及TGF-β1蛋白表达量显著增高(P＜0.01)，在一定浓度范围内，五味子酚能抑制TGF-β1与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量，与AngⅡ组相比差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。
　　结论:
　　①血管紧张素Ⅱ通过上调TGF-β1及下调Connexin43蛋白表达诱导心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原增生引起心肌纤维化。
　　②五味子酚通过下调TGF-β1及上调Connexin43蛋白表达抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原增生从而起到了抗心肌纤维化的作用。

目录

声明

摘要

中英文缩略词汇表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1．4 实验方法

2．2 心肌成纤维细胞传代

2．2．1 溶液配制

2．2．2 实验方法

2．3 心肌成纤维细胞的鉴定

2．3．1 仪器

2．3．2 材料与试剂

2．3．3 实验方法

2．4 MTT增值实验

2．4．1 仪器

2．4．2 试剂与材料

2．4．3 实验方法

2．5 蛋白免疫印迹分析(Western blot，WB)

2．5．1 仪器

2．5．2 材料与试剂

2．5．3 细胞铺板与蛋白提取

2．5．4 BCA法蛋白浓度测定

2．5．5 制胶

2．5．6 电泳

2．5．7 转膜

2．5．8 封闭与敷抗体

2．5．9 目标蛋白检测

2．6 统计学方法

第三章 结果

3．1 心肌成纤维细胞培养结果

3．2 免疫荧光鉴定结果

3．3 MTT增殖实验结果

3．4 Sal对Ang Ⅱ诱导的Connexin 43蛋白表达的影响

3．5 Sal对Ang Ⅱ诱导的TGF-p1蛋白表达的影响

3．6 Sal对Ang Ⅱ诱导的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白表达的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

致谢