辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及血管紧张素受体(AT1R)蛋白表达影响

摘要

目的:研究辛伐他汀(sim)对体外培养的新生大鼠心脏成纤维细胞的血管紧张素Ⅱ受体(ATlR)表达的影响,探讨Sim对心肌纤维化的作用机制。方法:1.细胞分离、培养、鉴定:以胰酶消化组织分离细胞,差速贴壁分离法收集心肌成纤维细胞,光镜和免疫组化法鉴定心肌成纤维细胞。2.心肌成纤维细胞增殖的检测:WST法测定细胞增殖,免疫荧光法测定心肌成纤维细胞ATlR的表达。3.实验分组:试验分两大部分(不同药物以及实验药物的浓度差别),第一部分:观察sim对心肌成纤维细胞的影响,主要分三个步骤:首先观察sim对基础状态下心肌成纤维细胞增殖影响,设不同浓度的sim(0.1-10umol/1)组和空白对照组。第二步观察sim对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)(10-6mol/l)刺激下心肌成纤维细胞增殖的影响,设窄白对照组、AngⅡ组(10-6mol/l)和不同浓度的sim(0.1-10umol/l)+AngⅡ(10-66mol/l)组。第三步观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(Losartan)(10-6mol/l)作用下心肌成纤维细胞增殖情况,设空白对照组、AngⅡ组(10-6mol/l)、Losartan组(10-6mol/l)、Losartan(10-6mol/l)+AngⅡ(10-6mol/l)组、Losartan(10-6mol/l)+AngⅡ(10-6mol/l)+Sim(1umol/l)组。WST法检测心肌成纤维细胞增殖情况。第二部分,观察sim对ATlR表达的影响,以免疫荧光检测上述各组ATlR的表达。结果:1.培养的细胞通过光镜和免疫组化法鉴定证实为心肌成纤维细胞。2.sim对心肌成纤维细胞增殖和ATlR表达的影响:①sim对基础状态下的心肌成纤维细胞增殖无明显影响,sim各浓度组(0.1-10umol/l)、Losartan组(10-6mol/l)与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。②sim呈浓度依赖性的抑制AngⅡ的促增殖作用。Sim各浓度组OD值明显低于AngⅡ组(P<0.01)；Losartan(10-6mol/l)+AngⅡ(10-6mol/l)组、sim(1 umol/l)+Losartan(10-6mol/l)+AngⅡ(10-6mol/l)组可抑制AngⅡ的促增殖作用,OD值明显低于AngⅡ组(P<0.01)；③sim在基础状态下能抑制ATlR的表达,sim各浓度组(0.1-10umol/1)ATlR均低于空白对照(P<0.01)。④sim呈浓度依赖性的抑制AngⅡ刺激下的ATlR的表达。sim各浓度组(0.1-10umol/1)ATlR表达减少,与AngⅡ组比较差异有统计学意义(P<0.01)；Losartan(10-6mol/l)组、Losartan(10-6mol/l)+AngⅡ(10-6mol/l)组对AngⅡ刺激下的ATlR的表达均无抑制作用,与空白对照组和AngⅡ组比较差异无统计学意义(P>0.05)；sim(1 umol/l)+Losartan(10-6mol/l)+AngⅡ(10-6mol/l)组可抑制AngⅡ刺激下ATlR表达,与AngⅡ组比较差异有统计学意义(P<0.01)结论:1.sim呈浓度依赖性的抑制AngⅡ介导的心肌成纤维细胞增殖。2.Losartan抑制AngⅡ介导的心肌成纤维细胞增殖3.sim呈浓度依赖性的抑制基础状态和AngⅡ介导的ATlR的表达,Losartan对基础状态和AngⅡ刺激下ATlR表达无抑制作用。

目录

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结论

参考文献

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致谢

他汀类药物治疗新领域(综述)

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