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主要英文缩写词
前言
一、关于有丝分裂染色体集缩的研究
1.组蛋白在染色体集缩中的作用
2.TopoⅡ(DNA topoisomeraseII,简写topoII)在染色体集缩中的作用
二、染色体结构维持蛋白
1.SMC蛋白的发现
2、SMC蛋白的结构特点
3.SMC蛋白的分类
4.SMC蛋白的功能
5.原核SMC蛋白
三、SMC蛋白在染色体集缩中的作用
四、SMC蛋白在有丝分裂染色体集缩中的可能作用机制
五、人集缩素的相关研究
六、RNA干涉技术和基因转导技术以及共转染技术
七、本研究的目的意义
实验材料
1.细胞
2.标准品
3.培养基和血清
4.质粒
5.菌株
6.工具酶
7.成套试剂
8.主要仪器
实验方法
一、HeLa细胞培养
二、HeLa细胞总RNA的提取
三、逆转录(RT，Reverse Transcription)反应
四、PCR反应
1.PCR引物
2.PCR扩增
五、从凝胶中纯化回收目的片段
六、中间克隆质粒的构建
(1)感受态宿主菌的制备
(2)连接反应
(3)转化
(4)重组质粒的鉴定
七、真核表达质粒的构建
(1)限制性酶切位点分析
(2)目的片段的制备
(3)真核表达载体pcDNA3.1(-)的制备
(4)连接反应
(5)重组质粒的转化和鉴定
八、RNA干涉(RNAi)质粒的构建
(一)cDNA编码区的选择
(二)寡核苷酸的设计
(三)将寡核苷酸片段亚克隆到pBS/U6载体上
(四)将寡核苷酸片段亚克隆到RNAi载体pREP4-PUR上
九、重组质粒的大量制备
(一).试剂
(二)操作步骤
十、Superfect转染程序
十一、转染后细胞的检测
1.荧光显微镜观察
2、RT-PCR检测
结果与分析
一、人集缩素SMC亚基hCAP-E和hCAP-C的C-末端真核表达质粒pcDNA 3.1+KNE和pcDNA3.1+KNC的构建
1.Hela细胞总RNA2％甲醛变性琼脂糖凝胶电泳结果
2.hCAP-E的C末端的真核表达质粒PcDNA3.1+KNE构建
3.HCAP-C的C末端的真核表达质粒pcDNA 3.1+KNC的构建
二、附加Kozac序列和核定位信号的GFP真核表达质粒pcDNA 3.1+KG的构建
1.中间克隆质粒T+KG的构建
2.真核表达质粒pcDNA 3.1+KG的构建
3.真核表达质粒pcDNA 3.1+KG的序列测定
三、人集缩素SMC亚基hCAP-E和hCAP-C特异的RNAi质粒的构建
(一)cDNA编码区的选择
(二)寡核苷酸的设计
(三)目的RNAi质粒的鉴定
四、真核细胞转染体系的建立
1.重组质粒的大量制备
2.核定位信号的有效性
3.转染真核表达质粒pcDNA3.1+KG的细胞形态
五、转染人集缩素SMC亚基hCAP-E和hCAP-CC-末端的作用分析
1.转染人集缩素SMC亚基hCAP-E的C-末端真核表达质粒pcDNA3.1+KNE导致Hela细胞表现多核和染色质桥现象
2.转染人集缩素SMC亚基hCAP-C的C-末端真核表达质粒pcDNA3.1+KNC导致细胞表现有丝分裂染色体不分开现象
六、转染人集缩素SMC亚基hCAP-E和hCAP-C特异的RNAi质粒RHE和RHC导致Hela细胞表现有丝分裂染色体不分开现象
1.人集缩素SMC亚基hCAP-E特异的RNAi质粒RHE导致Hela细胞表现有丝分裂染色体不分开现象
2转染人集缩素SMC亚基hCAP-C特异的RNAi质粒RHC导致Hela细胞表现有丝分裂染色体不分开现象
讨论
一、RNAi下调人集缩素SMC亚基hCAP-E和hCAP-C表达的结果分析
二、转染人集缩素SMC亚基hCAP-E和hCAP-CC-末端的作用分析
三、研究基因功能的共转染体系的建立
四、人集缩素SMC亚基C-末端真核表达构建的策略
结论
本论文的主要的创新点
参考文献
致谢
作者简历
东北师范大学;
