集缩素SMC蛋白对染色体集缩的影响

摘要

在细胞增殖过程中，染色质集缩是细胞分裂得以正常进行的重要条件，也是后期姊妹染色单体分离的序曲。染色体结构维持蛋白(SMC蛋白，structural maintenance of chromosome proteins)是20世纪90年代初发现的一类蛋白，它由两个SMC亚基和三个非SMC亚基组成，是染色质的构成部分，参与有丝分裂染色体集缩和分离。为了进一步研究集缩素对染色体集缩的影响，本实验建立起以GFP为标记的真核表达质粒共转染体系，利用实验室已有的特异干涉集缩素SMC亚基的RNAi质粒RHE和RHC，采用RNAi技术分别下调HeLa细胞中SMC亚基hCAP-E和HcAP-C的表达量。结果发现在细胞内其它蛋白水平不变，只有集缩素SMC亚基表达量被降低的情况下，细胞内染色质集缩出现异常，细胞分裂不完全，表现为细胞多核现象和细胞间的染色质桥现象。这些结果证明集缩素的两个SMC蛋白亚基在染色质集缩为染色体的过程中，同时发挥重要作用，缺一不可，是染色体正常集缩必不可少的蛋白。本实验首次利用共转染体系及RNA干涉技术对人类集缩素SMC亚基进行研究，具有重要的生物学意义。我们得到的结果为深入探讨集缩素在染色体集缩过程中的作用机制以及染色体的集缩机制的研究提供了有价值的信息。

目录

文摘

英文文摘

声明

引 言

一、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)

二、染色体结构维持蛋白(SMC蛋白)

三、集缩素与TOPOⅡ的作用关系

四、人类集缩素的研究

五、研究的目的意义

实验材料和方法

一、实验材料

二、实验方法

(一)HeLa细胞培养

(二)质粒的制备

(三)HeLa细胞转染

(四)转染后细胞的检测

(五)蛋白检测

(六)RT-PCR检测

结 果

一、真核表达质粒转染体系的建立

二、人集缩素SMC亚基HCAP-E特异的RNAi质粒RHE转染结果分析

三、人集缩素SMC亚基HCAP-C特异的RNAi质粒RHC转染结果分析

讨 论

一、真核表达质粒转染体系建立过程中遇到的问题

二、共转染体系的建立

三、RNAi下调人集缩素SMC亚基HCAP-E和HCAP-C表达水平的结果分析

四、染色体集缩过程中SMC蛋白与TOPOⅡ间的作用关系

结 论

参考文献

致 谢