p300/HDAC介导的可逆的乙酰化修饰参与Th1细胞因子IL-12和IL-18基因转录水平的调控

摘要

该文通过一系列共转染实验证实,p300/HDACs参与了IL-12p40/IL-18 p1启动子荧光素酶报告基因表达调控.野生型p300wt增强IL-12 p40/IL-18 p1启动子荧光素酶报告基因的活性,而HAT区缺失突变体p300△HAT不具有同样的激活效果.野生型E1A 12Swt能够抑制这种激活作用.这些结果证明p300的乙酰转移酶活性在调控IL-12 p40/IL-18 p1启动子荧光素酶报告基因的过程中是必需的.同时,我们的实验结果表明p300与IL-12 p40/IL-18 pl的相关转录因子(Ets、c-Rel、C/EBP、Spl和c-Fos)有协同作用,而转录因子与p300△HAT没有协同作用,E1A 12Swt能够抑制这种协同作用,证明p300的乙酰转移酶活性对于协同作用是必需的.多种HDAC能够抑制p300与转录因子对IL-12 p40/IL-18 p1启动子荧光素酶报告基因的协同作用.RT-PCR实验证实p300对于内源IL-12 p40/IL-18基因mRNA的丰度有增强作用.染色质免疫沉淀(ChIP)实验证实p300能够提高内源IL-12 p40启动子处的组蛋白乙酰化水平.通过以上研究,阐明可逆的乙酰化在IL-12 p40/IL-18基因调控中的作用,探讨乙酰化调控IL-12 p40/IL-18基因的作用机制,为IL-12p40/IL-18相关疾病的研究奠定理论基础.

目录

文摘

英文文摘

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英文缩写词

第一章文献综述

一、组蛋白乙酰化修饰酶及组蛋白密码学说

(一)组蛋白乙酰化酶分类及其功能

(二)组蛋白去乙酰化酶分类及其功能

(三)组蛋白密码假说

二、p300/CBP复合物的研究进展

(一)p300/CBP结构

(二)p300/CBP功能

(三)p300/CBP作用机制

三、细胞因子概述及Th1细胞因子IL-12/IL-18研究进展

(一)细胞因子概述

(二)IL-12研究进展

(三)IL-18研究进展

第二章前言

一、研究背景和立题依据

二、存在的问题

三、本文的研究内容和意义

第三章实验材料与方法

一、实验材料

二、实验方法

(一)基因组DNA提取

(二)质粒的构建

(三)质粒的大量制备

(四)磷酸钙瞬时转染方法

(五)荧光素酶分析

(六)RT-PCR

(七)ChIP(染色质免疫沉淀)

第四章实验结果与分析

一、乙酰化对IL-12 p40基因的调控

(一)IL-12 p40-pREP4报告基因质粒的构建及鉴定

(二)IL-12 p40-pREP4启动子荧光素酶活性分析

(三)RT-PCR分析p300对内源IL-12 p40 mRNA丰度的影响

(四)ChIP分析p300对内源IL-12 p40启动子乙酰化水平的影响

二、乙酰化对IL-18基因的调控

(一)IL-18 pl-pGL3报告基因质粒的构建及鉴定

(二)IL-18 pl-pGL3启动子荧光素酶活性分析

(三)RT-PCR分析p300对内源IL-18 mRNA丰度的影响

第五章讨论与结论

一、p300/HDACs是否参与IL-12 p40/IL-18 p1启动子荧光素酶报告基因表达调控

二、p300的乙酰转移酶活性在调控IL-12 p40/IL-18 p1启动子荧光素酶报告基因的过程中是否是必需的

三、p300与IL-12 p40/IL-18 p1的相关转录因子是否有协同作用，p300的乙酰转移酶活性是否必需

四、HDACs是否能影响p300与转录因子的协同作用

五、p300是否影响内源IL-12 p40/IL-18基因mRNA的丰度

六、p300是否影响内源IL-12p40/IL-18基因启动子乙酰化水平

七、基因表达调控机制的探讨

八、本文的结论与创新点

参考文献

致谢

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