产低温蛋白酶菌株Halomonas sp.SD-02的分离鉴定及其酶的提纯与特性研究

摘要

本论文从我国内蒙古自治区锡林郭勒盟苏尼特左旗乌日根塔拉苏木境内的查干诺尔盐湖(东经112°54′，北纬43°16′)泥土样品中分离筛选出-株产低温蛋白酶的适冷菌株，并进行了菌株鉴定、发酵条件优化、粗酶的提纯和酶学性质的研究，结果如下： 1．经过富集培养和分离纯化，获得了一支产低温蛋白酶的菌株。经形态学观察、生理生化特征研究和16SrDNA序列对比，初步确定该菌株为Halomonas属的一个新菌株，命名为Halomotla sp.SD-02。 2．在实验室摇瓶培养条件下，对碳源、氮源、金属离子、培养温度、PH、接种量等条件对Halomona sp.SD-02。菌株产低温碱性蛋白酶的影响进行了研究，通过单因子试验和正交实验，对产酶条件进行了优化，得到了菌株的最适产条件(g/L)如下：葡萄糖30，酵母粉15，Mn<'2+>0.4，Tween80 0.1，K<,2>HPO<,4>1，MgSO<,4>·7H<,2>O O.2，培养温度18℃，培养基初始PHl0，接种量为2％-4％。在此条件下培养48小时，酶活可达到305.9U/mL。 3．对Halomorla sp.SD-02。产生的低温碱性蛋白酶进行了分离与纯化。粗酶液经过硫酸铵沉淀、DEAE—SephadexA25离子交换层析、Sepharose 6B层析从发酵液分离纯化得到纯酶，经过纯化后的蛋白酶的提纯倍数为131.39，酶活回收率为6.16％。 4．对获得的低温蛋白酶纯酶特性进行了研究。该低温蛋白酶纯酶分子量为35KD，等电点为8.5，酶促反应最适温度30℃，最适PH为10.0，在温度≤45℃下保持稳定，可被EDTA不完全抑制，对5％H<,2>O<,2>和5mmol/LSDS耐受性较差；Mn<'2+>和Cu<'2+>对该酶有明显的激活作用，Ag<'+>、Al<'3+>、Hg<'2+>则能抑制酶活；该酶作用于Casein的Km为3.4mg/ml。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

一、低温微生物的特点

(一)微生物的低温适应能力

(二)国内外低温微生物的研究现状

(三)微生物低温适应机制研究

二、低温酶的研究现状及研究进展

(一)低温菌产生的低温酶

(二)低温酶的代谢合成

(三)低温酶的特性和结构

(四)低温酶的克隆和表达

(五)低温蛋白酶的生理生化特性

(六)低温蛋白酶的结构特征

(七)低温蛋白酶的研究方法

(八)低温蛋白酶的应用前景

三、本论文的研究目的

第一章产低温蛋白酶菌株的分离和鉴定

1.材料

2.方法

3.结果和讨论

第二章菌株产酶条件的优化

1.材料和方法

2.结果与分析

第三章低温蛋白酶的分离纯化及特性研究

1材料与方法

2.结果与分析

第四章结论与展望

1.研究结论

2.展望

参考文献

后记