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1.引言
1.1基因沉默的概述
1.1.1转录后基因沉默(PTGS)
1.1.2植物中PTGS的分子机理
1.1.3 PTGS诱导技术在植物转化中的应用
1.2番茄的抗除草剂基因工程
1.2.1抗除草剂bar基因
1.2.2根癌农杆菌Ti质粒介导番茄转化
1.3番茄类胡萝卜素代谢
1.3.1类胡萝卜素概述
1.3.2类胡萝卜素代谢途径中番茄红素的作用
1.3.3番茄红素β-环化酶(LYC-b)
1.4本研究的背景、目的和意义
2.材料与方法
2.1材料
2.1.1植物材料
2.1.2质粒和菌种
2.1.3化学试剂
2.1.4 PCR引物
2.1.5培养基
2.2实验方法
2.2.1植物表达载体的构建
2.2.2农杆菌介导的番茄转化
2.2.3再生植株的PCR检测
2.2.4转基因植株的RNA水平检测
2.2.5转基因植株的蛋白水平检测
2.2.6再生植株的Basta抗性测试
3.结果
3.1植物表达载体的构建
3.1.1引物设计
3.1.2番茄红素β—环化酶基因的克隆
3.1.3番茄红素β-环化酶基因的TA克隆
3.1.4 DNA测序及分析
3.15中间载体pDon221-b与表达载体pJawoh18-2b的构建
3.1.6植物表达载体pJawoh18-2b转化农杆菌LBA1100
3.2农杆菌介导的黄洋梨番茄转化
3.3转基因植株基因组DNA的PCR检测结果
3.4转基因植株的RNA水平检测结果
3.5转基因再生植株的Basta抗性检测结果
3.6转基因再生植株的果实中番茄红素β-环化酶沉默
3.7转基因植株的蛋白水平检测结果
4.讨论
4.1番茄红素β—环化酶基因沉默载体的构建
4.2番茄稳定转化pJawoh18-2b沉默载体的系统优化
4.3转番茄红素β—环化酶基因沉默载体的番茄的获得及鉴定
5.结论
参考文献
致 谢