蝙蝠蛾拟青霉多糖的结构及活性研究

摘要

本论文采用水煮、醇沉的方法，得到蝙蝠蛾拟青霉粗多糖CPHP，CPHP经冻融分级、酶-Sevag法联合脱蛋白、Sepharose CL—6B柱层析和HPLC制备等方法进行纯化，得到PHP，PHP经HPLC分析，为均一组分多糖，分子量为28kDa。
　　GC分析表明，PHP主要由 Man、Gal、Glc和Rha四种单糖组成，其摩尔比为13.36∶8.18∶3.59∶1。PHP经部分酸水解反应发现，PHP的主链由 Man和Gal两种单糖组成，糖链末端或支链主要由Glc、Gal和少量Rha组成。高碘酸氧化及Smith降解结果表明，1→、1→6键型是PHP的主要连接键型，同时还存在1→、1→2、1→2，6、1→4、1→4，6键型。
　　PHP甲基化分析结果表明，PHP中共存在6种键型，其中Man检出1→2、1→2，6两种键型;Gal检出1→和1→6两种键型;Glc检出1→6键型;Rha检出1→2键型，除 Rha外，检出的键型都能被高碘酸氧化，与高碘酸氧化结果一致。经计算，四种单糖的摩尔比为Man∶Gal∶Glc∶Rha=15.26∶9.10∶3.63∶1，与气相色谱结果基本一致。
　　CPHP对淋巴细胞的增殖及转化的影响结果表明，CPHP在100-400μg/ml浓度下，均能促进淋巴细胞的增殖，并且随着浓度的增加，促进作用越明显;在100-200μg/ml时，CPHP可以促进ConA诱导的T淋巴细胞的增殖，而对LPS诱导的B淋巴细胞的增殖无明显影响。
　　CPHP对S180肉瘤的抑制作用结果:PHP在50、100、200mg/kg浓度下的抑瘤率分别为0.32±0.15、0.44±0.18、0.34±0.24，而环磷酰胺阳性组的抑瘤率为0.75±0.10，该结果表明，PHP对S180肉瘤具有抑制作用，但抑制作用不如阳性药物环磷酰胺;与此同时，100mg/kgCPHP给药组小鼠的脾指数显著高于阴性对照组（p＜0.05），而CPHP给药组小鼠的胸腺指数显著低于生理盐水组;ELISA法检测血清中TNF-α水平结果表明，与阴性对照相比，CPHP在100mg/kg和200mg/kg给药后，荷瘤小鼠血清中的TNF-α水平明显增加，并且随着给药浓度的增加，血清中TNF-α水平越高。说明CPHP可以促进S180荷瘤小鼠TNF-α的生成。

目录

声明

摘要

第1章 引言

1．1 多糖结构研究进展

1．1．1 多糖一级结构分析

1．1．2 多糖高级结构的研究方

1．2 多糖活性研究进展

1．2．1 多糖的抗肿瘤活

1．2．2 抗病

1．2．3 抗氧

1．2．4 抗衰老

1．2．5 免疫调节作用

1．2．6 抗突变作用

1．2．7 抗辐射

1．2．8 抗炎症

1．2．9 抗凝血

1．2．10 降血糖

1．2．11 降血脂

1．3 蝙蝠蛾拟青霉的研究现状

1．3．1 蝙蝠蛾拟青霉种系研究进展

1．3．2 蝙蝠蛾拟青霉发酵工艺研究进展

1．3．3 虫草多糖结构研究进展

1．3．4 蝙蝠蛾拟青霉活性研究进展

1．4 本论文选题的依据和意义

第2章 蝙蝠蛾拟青霉多糖的提取和纯化

2．1 实验材料、试剂与仪器

2．1．1 实验材料

2．1．2 试剂

2．1．3 仪器

2．2 实验方法

2．2．1 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖的提取

2．2．2 蝙蝠蛾拟青霉多糖的纯化

2．2．3 Sepharose CL-6B凝胶柱层析制备单一级份多糖

2．2．4 蝙蝠蛾拟青霉多糖理化性质的研究

2．3 结果

2．3．1 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖的提取

2．3．2 CPHP的级性分布与分级纯化

2．3．3 CPHP的理化性质

2．3．4 PHP的理化性质

2．4 本章小结

第3章 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖结构研究

3．1 实验材料、试剂与仪器

3．1．1 实验材料

3．1．2 试剂

3．1．3 仪器

3．2 实验方法

3．2．1 红外光谱分析

3．2．2 部分酸水解

3．2．3 高碘酸氧化和Smith降解

3．2．4 甲基化分析

3．3 结果

3．3．1 红外光谱分析

3．3．2 部分酸水解

3．3．3 高碘酸氧化和Smith降解

3．3．4 甲基化分析

3．4 本章小结

第4章 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖生物活性测定

4．1 实验材料、试剂与仪器

4．1．1 实验材料

4．1．2 试剂

4．1．3 仪器

4．2 实验方法

4．2．1 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖对淋巴细胞体外增殖的影响

4．2．2 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖对小鼠S180肉瘤抑制作用

4．3 结果

4．3．1 CPHP对淋巴细胞增殖及转化的影响

4．3．2 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖对小鼠S180肉瘤抑制作用

4．4 本章小结

参考文献

致谢