PARP-1活性参与NF-κB的基因转录调控的机制研究

摘要

PARP-1是一种富含在细胞核中的酶，DNA损伤能引起其高度活化，利用NAD+作为供体转移多聚ADP核糖(PAR)到受体蛋白。PARP-1在维持基因组完整性和控制细胞周期具有重要作用。近期研究发现它参与了很多基因转录的调节。机体对抗微生物感染一个主要机制是产生ROS，而ROS极其容易导致宿主细胞DNA损伤。微生物侵染机体后宿主细胞Toll-like受体活化是天然免疫的重要途径。许多免疫相关的促炎或抗炎的基因的转录调节都与转录因子NF-κB的活化相关。但在感染性炎症进程中，PARP-1的活化机制，以及PARP-1如何在活化后参与基因转录的调控，尚缺乏深入探讨与揭示。旨在探讨TLR4识别的配体LPS刺激Ana-1小鼠巨噬细胞是否引发PARP-1的活化？LPS活化PARP-1参与的基因转录的主要机制？PARP-1如何与NF-κB相互作用参与转录调控？研究结果将有助于进一步理解PARP-1在感染性炎症进程中参与基因转录调控的机制，及PARP-1活化后在胞内整合的信号传导途径。

目录

声明

摘要

前言

一、PARP-1的活化和基因转录调控

(一)PARP-1的结构、活化和代谢

(二)PARP-1的生物学功能

(三)PARP-1参与的信号转导与基因转录调控

二、NF-κ B的基因表达调控

(一)NF-κ B的分子结构及活化机制

(二)NF-κ B的信号途径

(三)NF-κ B参与的基因转录调控

三、本论文的研究目的和意义

材料与方法

一、实验材料

(一)细胞及其培养试剂

(二)抗体和质粒

(三)试剂和酶类

(四)仪器设备

(五)主要溶液

二、实验方法

(一)细胞的培养及冻存

(二)瞬时转染

(三)荧光素酶双报告检测

(四)免疫印迹及免疫沉淀

(五)免疫荧光

(六)反式聚合酶链式反应(RT-PCR)

(七)胞内活性氧检测

实验结果与分析

一、LPS能够促进小鼠巨噬细胞中PARP-1表达和蛋白PAR化修饰水平升高

二、PARP-1活性引起NF-κ B转录活性增强和促炎基因的表达

三、LPS刺激引起p65蛋白发生PAR修饰和PARP-1与P65分子共沉淀

四、PARP-1的活化整合了ERK信号途径

五、ERK和ROS对NF-κ B的转录有协同作用

讨论

一、LPS能够促进Ana-1细胞中PARP-1的活化

二、PARP-1作用影响NF-κ B转录活化

三、PARP-1的活化整合ERK信号途径

结论和主要创新点

参考文献

英文缩写词

致谢

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