人骨唾液酸蛋白原核表达及胶体金检测方法的建立

摘要

本研究从NCBI中查找人BSP基因序列，经过序列分析，合成BSP基因片段，利用PCR、酶切、连接、转化等技术构建BSP原核表达载体菌E. coliBL21-pET-15b-BSP。利用IPTG诱导BSP表达，经过对诱导条件的筛选，在20℃、150r/min、0.8 mM IPTG、诱导6h条件下大量表达可溶性蛋白，经过Ni-NTA纯化、透析袋浓缩得到纯度为96.3%、浓度为7.44mg/mL的BSP蛋白，经过SDS-PAGE分析重组BSP分子量约为37 kDa。利用市售BSP及多对抗体原料，通过建立的 ELISA方法，筛选得到针对与本文重组BSP具有良好特异性、不同表位的高效抗体对，同时验证了制备的BSP具有良好的免疫原性。建立胶体金定性检测方法，灵敏度为100 ng/mL，重复性95%，4℃可保存10个月。得到了具有活性的重组人BSP，有望用作抗原原料；初步建立了BSP胶体金免疫层析快速半定量检测方法，为临床快速检测血清BSP提供了理论基础和技术保障。

目录

声明

第一章 绪论

1.1 骨唾液酸蛋白简介

1.2 BSP在检测方面应用

1.3 胶体金免疫层析检测技术

1.4 本课题的研究背景及意义

1.5创新点及主要研究内容

第二章 构建重组BSP表达菌

2.1材料

2.2方法

2.3结果

2.4讨论

第三章 重组BSP表达及纯化

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

第四章BSP胶体金免疫层析检测方法的建立

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 讨论

结论

致谢

参考文献

附录