外源p53基因过度表达对肝癌细胞系HepG2基因表达的影响

摘要

目的：利用哺乳动物基因诱导表达系统--Tet-On<'TM>基因表达系统,构建p53基因诱导表达可调控的稳定细胞系,初步研究外源p53基因过度表达对HepG2细胞基因表达的影响,为进一步直接克隆p53下游基因奠定基础.方法：利用基因重组技术构建含目的基因p53cDNA的表达质粒pTRE-p53,运用限制性内切酶酶切分析鉴定,进一步通过DNA测序确证.通过电穿孔转染技术,将表达质粒Ptre-p53和调控质粒pTet-on同时导入肝癌细胞系HepG2中,G418筛选,挑选单克隆,加入强力霉素（Dox）诱导p53基因表达,运用WesternBlot检测P53蛋白的表达情况,选择p53基因表达水平最高的单克隆,进一步通过免疫组化确证.利用RT-PCR技术检测p53基因表达诱导与非诱导时HepG2细胞中基因表达的差异.结论：建立了野生型p53基因诱导表达可调控的稳定的细胞系,为进一步直接克隆p53下游基因奠定基础;p53基因过度表达对HepG2细胞基因表达有影响,即引起其下游基因表达水平发生变化.

目录

前言

材料与方法

结 果

讨 论

结论

参考文献

综 述

致 谢