临床分离铜绿假单胞菌多重耐药株外排泵机制的研究

摘要

目的:研究铜绿假单胞菌临床分离耐药株中的多重药物外排泵(以MexA-MexB-OprM为例)的耐药机制.探讨在临床中分离的多重耐药铜绿假单胞菌菌株是否存在MexA-MexB-OprM外排泵表达的增强及其调节基因mexR的突变.方法:收集来自临床送检标本的铜绿假单胞菌多重耐药株13株和对常用抗菌药物敏感菌5株.质控菌株ATCC27853.进行常规分离再鉴定.采用K-B纸片法检测上述细菌对16种抗菌药物的药敏情况.分别采用标准纸片扩散法和头孢西丁三维试验检测ESBLs和AmpC酶.提取细菌的外膜蛋白进行SDS-PAGE分析,比较外膜蛋白OprM表达的差异.并进一步提取多重耐药菌株的染色体DNA,PCR反应扩增MexA-MexB-OprM外排泵的调节基因mexR,对产物进行测序,分析突变情况.结果:1.所收集的13株临床多重耐药株的耐药表型与多重药物外排泵MexA-MexB-OprM表达增强菌株的耐药表型基本一致.所收集的5株临床敏感菌对所测抗生素全部敏感.2.所收集的13株临床多重耐药株均未检测到ESBLs和AmpC酶.3.铜绿假单胞菌的外膜蛋白SDS-PAGE分析显示多重耐药菌株较完全敏感菌株和质控菌株在49kDa处的条带表达明显增强.4.13株多重耐药菌株的mexR基因序列分析结果显示存在编码基因的点突变,共存在4个位置的碱基置换,其中两个引起编码氨基酸的改变.结论:1.13株临床分离铜绿假单胞菌多重耐药株存在MexA-MexB-OprM的外膜蛋白成分OprM的表达增强,提示有该外排泵耐药机制的存在.2.13株多重耐药菌的mexR基因存在点突变,提示mexR基因突变引起MexA-MexB-OprM外排泵表达增强.

目录

文摘

英文文摘

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缩略词表

第一章前言

第二章对象与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

第六章参考文献

第七章附录

综述

致谢

攻读学位期间主要的研究成果