VP3基因的特异性抑制鼻咽癌生长的实验研究

摘要

鼻咽癌是中国南方地区常见的恶性肿瘤之一，目前主要采取局部放疗，鼻咽癌放疗后5年生存率一直徘徊在40-50％，残灶或复发盾第二次放疗仅对25％的患者有效，5年生存率仅为12-23％，且放射损害大，若再复发，第三次放疗则基本无效。因此寻找一种新型化学药物，能够有效杀死鼻咽癌细胞，以弥补放疗的不足，对鼻咽癌的临床一线治疗具有重要战略地位。 有系列研究表明，鼻咽癌对传统化疗不敏感的因素主要是由于鼻咽癌患者中存在P53抑癌基因功能的缺失以及bcl-2基因的表达上调，因此我们寻找的新型化学药物必须不依赖于这两个途径来杀伤鼻咽癌细胞，近年来，随着肿瘤生物学治疗的发展，提出了基因治疗是一种新型的分子化疗这一理念，为恶性肿瘤的化学治疗开辟了新思路。Remilio.A.L等发现，VP<,3>基因编码的apoptin蛋白杀伤恶性肿瘤细胞的途径并不依赖于P53途径，更加令人瞩目的是bcl-2基因的高表达还能增强其杀伤效应；Notebom研究小组对其进行了系列的研究后发现，VP<,3>基因还可特异性杀死多种恶性肿瘤细胞及转化细胞，而对正常细胞及未转化细胞无损伤，这些发现均为鼻咽癌的化学治疗带来了曙光。因此，本研究设想，利用VP3基因的以下两点优势1、可高效杀伤癌细胞；2、对正常细胞无毒性，进行鼻咽癌的化疗敏感性研究，在体外实验的水平上采用MTT、流式细胞术、Tunel染色及AO染色观察其对鼻咽癌细胞的特异性促凋亡作用(及特异性杀伤作用)，然后建立建立裸鼠移植瘤模型，在模型上观察其抑瘤效果及毒副作用。整个研究内容分四部分进行，第一部分主要是真核质粒表达载体pcDNA3-1(-)CMV.VP<,3>-His的构建，为后面的体外及体内实验打下坚实的基础。本研究的第二部分主要是建立表达VP3基因的鼻咽癌细胞及正常鳞状上皮细胞株，通过RT-PCR、Western-Blotting鉴定VP<,3>基因的表达，为体外实验做准备。第三部分的研究内容为VP<,3>基因对鼻咽癌杀伤效应的体外实验研究，通过MTT、流式细胞术、DNA-Ladder、Tunel染色、AO染色观察分析其杀伤效应(及促凋亡效应)，经过两样本t检验后得出P<0.05，证实VP<,3>基因对鼻咽癌有特异性杀伤效应(及特异性促凋亡效应)。第四部分的内容主要是在裸鼠移植瘤模型上观察VP<,3>基因对鼻咽癌的抑瘤效果。以转染后30d为时间点，得出其抑瘤效应为66.1％。 本研究最后得到以下结论：(1)成功构建了真核质粒表达载体PcDNA3.1(-.)VP3-His；(2)vP<,3>基因在体外实验的水平上可特异、高效杀伤鼻咽癌细胞；(3)VP<,3>基因在裸鼠移植瘤模型上有明显的抑瘤效果。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词注释

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前言

实验流程

第一部分：构建VP3基因表达质粒载体

第二部分：建立表达VP3基因的鼻咽癌细胞及正常鳞状上皮细胞株

第三部分：VP3基因对鼻咽癌细胞特异性促凋亡作用的体外实验研究

第四部分：VP3基因对鼻咽癌移植癌效应的体内实验研究

参考文献

结论

综述 凋亡素特异性高效杀伤肿瘤细胞的分子作用基础

致谢