川芎嗪对凝血酶诱导血管内皮细胞组织因子表达的影响及机制研究

摘要

组织因子(tissue factor，TF)是体内生理性止血和病理性血栓形成中凝血反应的重要启动因子。TF是一种跨膜糖蛋白，它既是凝血因子VII(FVII)和激活的VII因子(FVIIa)的受体，又是FVIIa的辅因子。它与FVII或FVIIa形成复合物，通过激活FIX和FX来启动凝血过程。 最近的研究表明，TF除了参与凝血过程以外，还参与炎症反应。在凝血一炎症网络中，血管内皮细胞表达的TF是炎症和血栓形成的重要衔接物之一。血管内皮细胞通过产生不同的促凝和抗凝活性物质，维持凝血与抗凝系统之间的平衡，调节生理性止血和病理性血栓形成。血管内皮细胞、单核细胞表达TF异常与许多疾病过程中的血栓事件密切相关，包括动脉粥样硬化、败血症、急性心脑血管血栓栓塞事件和DIC等等。许多炎症细胞因子可以刺激血管内皮细胞和单核细胞表达TF。凝血酶(thrombin)是一个生物活性很广的物质，除参与凝血反应，促使血栓性疾病的发生发展外，也参与体内炎症反应。 川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)是从中药川芎的根茎中提取的有效成分，化学结构为四甲基吡嗪。川芎嗪具有细胞保护、抗氧化、抗血小板聚集等多种作用。但川芎嗪是否影响凝血酶诱导的血管内皮细胞促凝活性增加及其机制尚未见报道。 研究目的:①观察凝血酶对人脐静脉血管内皮细胞株ECV304 TF表达的影响以及TMP对其的干预作用；②探讨TMP干预凝血酶诱导血管内皮细胞TF表达的作用机制。 方法:脐静脉血管内皮细胞株ECV304培养采用RPMI-1640完全培养基；MTT测细胞活力；一期凝固法测总的细胞促凝活性(PCA)：采用RT-PCR的方法检测TF mRNA；免疫组织化学染色观察NF-KB的变化。 结果: ①不同浓度的凝血酶(1.25～20 U／ml)能呈剂量依赖性地诱导ECV304细胞的PCA增加(r=O.9602，P<0.01)，在20 U／ml达到峰值。②单用TMP(125～1000 u g／ml)对ECV304细胞PCA没有影响(p>0.20)。但在给予凝血酶之前30 min用TMP(125～1000 u g／ml)预处理ECV304细胞，凝血酶(20 U／ml)刺激ECV304细胞PCA(r=0.9644，p<0.01)和TF mRNA(r=0.9576，p<0.05)增加的作用明显地受抑制，并存在显著量效关系，1000μ g／ml时其抑制作用最强。③一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME可明显地抑制TMP拮抗凝血酶促进ECV304细胞PCA和TF mRNA增加的作用(p<0.05)。④免疫组织化学染色发现凝血酶作用45min可引起ECV304细胞NF-k B从胞浆移入核内；TMP预处理15 min可抑制凝血酶引起的ECV304细胞内NF-k B的转位。 结论:①凝血酶能诱导ECV304细胞表达TF,TMP具有在mRNA水平抑制凝血酶刺激ECV304细胞TF表达的作用；②NO途径参与了TMP抑制凝血酶诱导ECV304细胞TF表达的作用；③TMP和凝血酶可能通过影响NF-k B的活化来改变TF的表达。

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文摘

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论文说明：缩略词表

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

第一章川芎嗪对凝血酶诱导血管内皮细胞组织因子表达的影响

第二章川芎嗪抑制凝血酶诱导血管内皮细胞组织因子表达的机制研究

参考文献

综述 凝血酶的生物学特性

致谢

在读期间所发表（待发表）的论文清单