雷公藤内酯醇对A431细胞和PMA诱导的HaCaT细胞COX-2表达的影响

摘要

目的： 1.观察佛波酯(Phorbol-12-Myristate-13-Acetate，以下简称PMA)对良性角质形成细胞株(HaCaT细胞株)COX-2 mRNA和蛋白表达水平的影响，探讨COX-2基因在PMA致癌机制中的作用。 2.观察雷公藤内酯醇(triptolide，以下简称TP)对皮肤鳞癌细胞株(A431细胞株)和PMA诱导的HaCaT细胞COX-2 mRNA表达水平的影响，探讨TP抗皮肤肿瘤的作用机制。 研究方法： 1.采用RT-PCR和Western-blot法分别检测不同浓度PMA处理组HaCaT细胞COX-2 mRNA和蛋白的表达水平并比较各组之间表达水平的差异。 2.采用RT-PCR法检测不同浓度TP处理组A431细胞、TP+PMA处理组和仅PMA处理组HaCaT细胞COX-2 mRNA的表达水平，比较不同浓度TP处理组A431细胞之间以及TP+PMA处理组与仅PMA处理组HaCaT细胞之间COX-2 mRNA表达水平的差异。 结果： 1.HaCaT细胞不表达COX-2 mRNA和蛋白，PMA可诱导其COX-2 mRNA和蛋白的表达，其表达水平呈剂量依赖性递增，不同浓度处理组两两相比经统计学分析，差异具有显著性(p<0.01)； 2.TP可抑制PMA诱导的HaCa％T细胞COX-2 mRNA表达，与PMA处理组相比，差异具有显著性(P<0.01)； 3.A431细胞表达高水平的COX-2 mRNA，TP可抑制A431细胞COX-2 mRNA的表达，其表达水平随TP浓度增加呈剂量依赖性减弱，不同浓度处理组两两相比经统计学分析，差异具有显著性(P<0.01)。 结论： 1.良性角质形成细胞株HaCaT细胞不表达COX-2 mRNA和蛋白，而PMA可诱导其COX-2 mRNA和蛋白的表达，提示PMA.致皮肤癌的机制与COX-2的过度表达有关。 2.皮肤鳞癌细胞株.A431细胞COX-2 mRNA高表达，提示COX-12的过表达与皮肤鳞癌的发生有关。 3.TP抑制A431细胞及PMA诱导的HaCaT细胞COX-2 mRNA表达，TP可能通过抑制COX-2的表达发挥抗皮肤肿瘤的作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写

声明

第一章 前 言

第二章 材料与方法

2.1 实验用细胞株

2.2 仪器设备与试剂

2.2.1 主要仪器

2.2.2 主要试剂

2.3 液体配制

2.3.1 完全培养基的配制

2.3.2 细胞蛋白裂解液(RIPA buffer)的配制

2.3.3 工作液

2.4 实验步骤

2.4.1 细胞培养

2.4.2 细胞总RNA提取和RT-PCR

2.4.3 细胞蛋白质提取和Western-blot

2.5 统计学分析

第三章 结果

3.1 PMA对HaCaT细胞COX-2 mRNA表达以及TP对PMA诱导的HaCaT细胞COX-2 mRNA表达的影响

3.2 PMA对HaCaT细胞COX-2蛋白表达的影响

3.3 TP对A431细胞COX-2 mRNA表达的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参 考 文 献

综述

致 谢