成人急非淋M型患者AML1/ETO mRNA表达与临床意义及其scFv单链抗体文库构建的初步研究

摘要

t(8；21)(q22；q22)染色体易位形成的AML1/ETO (AE)融合基因编码产物是一种多功能蛋白质，可通过影响细胞内许多信号传导系统和靶分子而参与细胞的分化与增值，细胞凋亡以及自我更新等过程。因此,AE融合蛋白被认为是引起t(8；21)(q22；q22)染色体易位阳性的成人急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)即急非淋，特别是ANLL-M<,2>型患者发病的关键因素，也是靶向治疗该类患者一个潜在的靶分子，而高效、特异性靶向传递药物抑制或干扰AE的表达是靶向治疗AE融合基因表达阳性患者的关键。 近期发现，单链抗体可变区片段(scFv)即单链抗体能够高效、特异性传递药物到达靶细胞。为此，本研究在分析了AE融合基因mRNA在ANLL-M<,2>型患者中的表达及其临床意义的基础上进一步初步构建了AE融合基因表达阳性患者的scFv单链抗体文库。 第一章 ANLL-M2型患者AE基因mRNA表达及其临床意义 目的：分析ANLL-M2型患者AE融合基因的表达，并探讨其与临床表现，疗效的关系以及在预后判断中的意义。 方法：采用巢式逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析ANLL-M<,2>患者AE融合基因mRNA表达，根据AE融合基因表达结果将患者分成 AE 融合基因表达阳性组(A)和AE融合基因表达阴性组(B)。然后，对两组患者的临床症状，体征，白细胞计数及骨髓原始细胞数等进行比较分析，并比较其治疗缓解率。通过8个月随访，评价其在预后判断中的意义。 结果：在23例 ANLL-M<,2>患者中，12例可检测到AE融合基因mRNA表达，占所检测患者的52.2％。其中，11例为M<,2a>，1例为M<,2b>。与AE融合基因mRNA表达阴性患者比较，AE融合基因mRNA表达阳性患者平均年龄较轻，外周血白细胞计数较低，临床上易出现发热，出血。经治疗后，AE融合基因mRNA表达阳性患者缓解率为75％，而AE融合基因mRNA表达阴性患者为36％。经8个月随访发现，1例AE融合基因mRNA表达阴性患者在缓解后第4个月复发并出现中枢神经系统白血病而死亡，另1例在缓解后第7个月复发，而AE融合基因mRNA阳性患者在8个月随访中无复发。 结论：在ANLL-M<,2>患者中50％左右表达AE融合基因mRNA，AE融合基因mRNA表达阳性患者更易出现发热，出血倾向，但是他们的治疗效果较好，预后良好。 第二章 AE基因表达阳性患者scFv单链抗体文库构建的初步研究 目的：构建AE融合基因mRNA表达阳性患者scFv单链抗体文库。 方法：通过RT-PCR 分别扩增全套AE融合基因mRNA表达阳性患者重链(VH)和轻链(VL)可变区基因，切胶回收目的片段，用连接肽(Linker)将VH、VL连接成VH-Linker和VL-Linker。 结果：通过67种PCR扩增，从 AE 融合基因mRNA阳性M<,2>型患者骨髓淋巴细胞中扩增出全套人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因并得到6种VH家族基因，11种VL家族基因(5种Vκ和6种VX)。同时通过连Linker将VH、Vκ和 Vλ拼接成6种VH-Linker、5种Vκ-Linker和6种Vλ-Linker。 结论：通过大量的PCR扩增，成功地从AE融合基因mRNA表达阳性患者骨髓淋巴细胞中扩增出人全套重链(VH)和轻链(VL)可变区，并通过连接肽(Linker)拼接成VH-Linker和VL-Linker，为下一步构建scFv单链抗体库奠定了基础。

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文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

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前言

第一章ANLL-M2型患者AE基因mRNA表达及其临床意义

1.1材料和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4结论

第二章AE基因表达阳性患者scFv单链抗体文库构建的初步研究

2.1材料与方法

2.2实验结果

2.3讨论

2.4结论

参考文献

综述基因工程治疗性抗体的研究进展

致谢