细胞色素P450在鼻咽癌紫杉醇抵抗细胞系中的表达

摘要

目的：1)建立鼻咽癌耐药细胞系的合适的保存条件。2)了解细胞色素P450家族在鼻咽癌紫杉醇敏感细胞(CNE1)和耐药细胞(CNE1/Taxo)中是否有表达，其表达是否具差异性。 方法：1.用集落形成试验检测CNE1和CNE1/Taxol对紫杉醇的半数抑制量(IC50)及其耐药指数(RI)，验证已建立的耐药细胞株的耐药性；2.用慢速冻存法和快速冻存法保存细胞，用细胞计数法观察复苏后鼻咽癌耐药细胞系生存率的差异。3.用cDNA microarray实验大规模的检测CNE1/Taxol和CNEl的P450表达。4.运用GCOS和Dchip软件分析芯片数据，明确在CNE1和CNE1/Taxol中P450的表达变化。 结果：1.快速冻存法保存的细胞复苏后生存率明显高于慢速冻存法；2.基因芯片的分析结果显示，p450家族的53个成员中，9个成员在鼻咽癌细胞系中表达。与亲本鼻咽癌细胞系比较，抵抗细胞系中的表达显著增强的基因有5个，即CYP1A1、CYP2R1、CYP2U1、CYP3A5、CYP51A1基因，其中CYP1A1和CYP2R1的表达随紫杉醇的药物处理而继续增强。 结论：快速冻存法是简单有效保存鼻咽癌紫杉醇抵抗细胞系的一种方法。CYP1A1和CYP2R1在鼻咽癌细胞中的诱导性表达与紫杉醇耐药的形成可能有关。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章前言

第二章材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

2.2.2细胞培养(Cell Culture)

2.2.3不同冻存方法复苏细胞存活生长能力比较

2.2.4细胞总RNA的提取和浓度及纯度的检测:

2.2.5 Affymetrix表达谱芯片实验

第三章实验结果

3.1 CNE1和CNE1/Taxol培养期间形态学观察

3.2不同冻存方法复苏后细胞存活率比较

3.3 CNE1与CNE1/Taxol对紫杉醇的耐药性或敏感性

3.4分光光度仪测量四种细胞RNA抽提浓度和纯度

3.5基因芯片数据分析

第四章讨论

4.1鼻咽癌紫杉醇耐药细胞株的维护

4.2 Affymetrix Human Genome U133 plus 2.0 array芯片的优点及在肿瘤耐药机制研究中的应用

4.3 P450亚家族基因在CNE1和CNE1/Taxol中的表达差异及意义

第五章结论

参考文献

第六章综述 细胞色素P450某些亚型的研究进展

致谢

攻读学位期间发表的文章