染色体易位携带者植入前遗传学诊断体系的建立与应用

摘要

目的：(1)以单细胞细菌人工染色体一荧光原位杂交(bacterial artificial chromosome-Fluorescent in situ hybridisation，BAC-FISH)为核心技术，建立染色体易位携带者植入前遗传学诊断(preimplantationgenetic diagnostic，PGD)体系。(2)将建立的染色体易位携带者PGD体系应用于临床。 方法：(1)从遗传咨询门诊中筛选一例经G显带证实为染色体易位携带者(即病例1，核型为46，XY，t(1；12)(q32；q13))，有体外受精/单精子卵胞浆内注射(in-vitro fertilization/intracytoplasmicsperm injection，IVF/ICSI)指征，且要求行PGD的患者，根据患者核型选择合适的BAC克隆，自制BAC探针，用正常人及该携带者的外周血淋巴细胞、我室建株淋巴细胞行预实验。然后，对染色体核型正常夫妇IVF/ICSI后发育不良的卵裂球细胞行单细胞BAC-FISH，建立基于BAC-FISH技术的染色体易位携带者PGD体系。(2)用建立的诊断体系，对4例染色体易位携带者夫妇，分别行1个PGD周期，(病例1为男性携带者，46，XY，t(1；12)(q32；q13)；病例2为男性携带者，46，XY，t(7；13)(p10；q10)；病例3为女性携带者，46，XX，t(1；5)(p32；q35.1)；病例4为男性携带者，45，XY，der(13；14)(q10；q10)，4例携带者的配偶染色体核型均正常)。 结果：(1)体系建立中，所选BAC探针在外周血淋巴细胞间期核的平均杂交效率为95.9％，特异性为100％。建株淋巴细胞固定中，35个淋巴细胞用吐温-20/盐酸(Tween-20/HCL，TH)法固定，34.3％(12/35)的细胞在固定中丢失，65.7％(23/35)的细胞见单核，0％(0/35)的细胞见2个核。98个淋巴细胞用吐温-20/盐酸+甲醇：冰醋酸(Tween.20/HCL+Methanol：Acetic acid，TH+MA)法固定，3.1％(3/98)的细胞在固定中丢失，94.9％(93/98)的细胞见单核，2％(2/98)的细胞见2个核。共获得捐献卵裂球细胞205个，205个用于固定，0％(0/205)的细胞在固定中丢失，47.4％(97/205)的细胞见单核，6.8％(14/205)的细胞见多核(≥2个核)，19.0％(39/205)的细胞见核碎片，26.8％(55/205)的细胞未见核。97个卵裂球细胞用于杂交，杂交后93个见信号，杂交效率95.9％(93/97)。(2)4例染色体易位携带者PGD结果表明，病例1、病例2、病例4分别有1个、1个、4个胚胎未见异常，病例3的2个胚胎无法诊断。病例1、2、3、4分别移植1个、1个、2个、3个胚胎，其中病例1、2、3均未妊娠，病例4已获临床妊娠，目前正在妊娠中。 结论：(1)以单细胞BAC-FISH为核心技术建立了染色体易位携带者：PGD体系。(2)建立的染色体易位携带者PGD体系，相对于目前国内所用的2个商业化端粒探针行染色体易位携带者PGD更经济、准确。(3)应用该体系已成功使一例13、14号染色体相互易位携带者妊娠。(4)该体系为其他染色体异常的PGD奠定了基础，将为更多的染色体异常患者及家庭提供更全面的PGD。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：实验仪器及所用试剂、缩略词表

声明

前言

第一章染色体易位携带者PGD体系的建立

1.研究材料

2.研究方法

3.结果

4.讨论

第二章染色体易位携带者PGD体系的应用

1.研究对象

2.研究方法

3.结果

4.讨论

结论

参考文献

综述 染色体易拉携带者的植入前诊断研究进展

致谢

个人简历