日本血吸虫童虫细胞型免疫原的确认与免疫调节剂联用抗感染效果观察

摘要

[目的]前期在小鼠模型中研究证明日本血吸虫(Sj)童虫活细胞可诱生抗攻击感染免疫力。本研究为证明其保护性效果是否与免疫原物理性状有关，比较童虫细胞型和非细胞型免疫原所诱生的保护性差异。 [方法]用家兔经Sj尾蚴感染后第18d获得童虫，剪切法制备童虫细胞，细胞超声冻融制备非细胞抗原。动物实验：取50只单性清洁级昆明鼠随机分成对照(PBS)组、童虫细胞型抗原(SCA)免疫组和童虫细胞非细胞型抗原(SNCA)免疫组、童虫碎片抗原(SWFA)免疫组和童虫可溶性抗原(SWSA)免疫组。经小鼠腹股沟皮下肌肉接种免疫原3次，每次间隔2周。末次接种后第4周作攻击感染(30±1尾/鼠)，感染后第45d观察虫荷、肝卵荷、肝虫卵肉芽肿大小。此外，用ELISA检测实验鼠血清中特异性抗体动态变化。 [结果]PCR鉴定所用童虫细胞无兔源性成分。保护性指标比较显示：SCA组、SNCA组、SWFA组和SWSA组的减虫率分别为46.8％、35.3％、31.4％和8.0％；减卵率分别为：56.2％、38.2％、30.6％和20.2％；SWSA组未见明显减卵效果。SCA组小鼠肝虫卵肉芽肿显著小于其他4组。免疫学指标检测显示：SCA组、SNCA组、SWFA组和SWSA组各鼠血清中均可检测到抗Sj童虫抗体，其滴度与免疫次数呈正相关，在各组间差别不显著。 [结论]进一步证明Sj童虫细胞型免疫原可诱导小鼠产生较理想的保护性效果，其诱生机制之一，与免疫原物理性状有关。

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论文说明：缩略词

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前言

第一章Sj童虫细胞型与非细胞型免疫原诱生的保护性效果差异

1材料与方法

1.1寄生虫和实验动物来源

1.2主要仪器

1.3主要试剂及试剂(盒)

1.4吸虫童虫的收集

1.5血吸虫童虫的各类免疫原的制备

1.6 PCR检测宿主细胞污染和细胞种属特异性鉴定

1.7免疫方案

1.8攻击感染

1.9血清样本采集及特异性抗体的检测

1.10保护性效果观察

1.11统计学分析

2结果

2.1 Sj童虫细胞颗粒性抗原种属来源鉴定

2.2免疫鼠血清中抗SWSA-IgG水平

2.3免疫保护性效果观察

3讨论

第二章Sj童虫细胞型与非细胞型免疫原在小鼠注射部位的动态变化

1.材料与方法

1.1寄生虫和实验动物

1.2主要仪器及试剂(盒)

1.3虫体获取与细胞制备

1.4细胞型抗原与非细胞型抗原在小鼠接种部位的动态消失

2结果

2.1 Sj童虫细胞型免疫原与童虫非细胞型免疫原镜下形态的比较

2.2 Sj童虫两类抗原注射部位组织的SDS-PAGE结果

.3 Sj童虫两类抗原注射部位组织Western-blot分析结果

2.4免疫组织化学染色结果分析

2.5 HE染色病理切片结果分析

3讨论

第三章Sj童虫细胞与不同免疫调节剂联用的保护性效果观察

1材料和方法

1.1寄生虫来源和实验动物

1.2主要仪器和试剂(盒)

1.3日本血吸虫童虫的收集

1.4用于免疫的免疫调节剂

1.5免疫原的制备

1.6 PCR检测宿主细胞污染和细胞种属特异性鉴定

1.7免疫方案

1.8攻击感染

1.9血清采集及特异性抗体的检测

1.10保护性效果观察

1.11统计学分析

2结果

2.1免疫鼠血清中抗SWSA抗体水平

2.2免疫保护性效果观察

3讨论

结论

参考文献

综述 免疫调节剂及其在疫苗中的研究进展

致谢

攻读学位期间主要研究成果