磁性纳米颗粒介导PTEN基因转染对耐顺铂肺腺癌细胞生长及耐药的影响

摘要

目的:评价聚乙烯亚胺（PEI）包裹的氧化铁磁性纳米颗粒polyMAG-1000介导野生型PTEN基因转染的转染效率、表达持续性及体系毒性。研究野生型PTEN基因转染对耐顺铂肺腺癌A549/DDP细胞生长及耐药的影响。 方法:1.以polyMAG-1000及脂质体分别介导野生型PTEN基因转染A549/DDP细胞，通过荧光显微镜及流式细胞仪观察转染效率；通过RT-PCR、免疫细胞化学检测转染前后PTEN mRNA、蛋白的表达；以MTT法观察转运体系的毒性。2.进一步以MTT法检测PTEN基因转染对A549/DDP细胞生长及耐药的影响，以流式细胞仪观察转染后细胞周期及凋亡的变化。 结果:1.PolyMAG-1000介导的转染其转染效率（52.22±2.41）％明显高于脂质体（32.15±3.13）％。RT-PCR结果显示磁性纳米颗粒介导组在转染后5天内mRNA含量无明显下降，脂质体介导组PTEN mRNA含量逐渐下降。PolyMAG-1000转运系统在2μl/ml（v：v）浓度，4h作用时间无明显的细胞毒性。2.野生型PTEN基因转染A549/DDP细胞后2-6天其存活率下降；纳米颗粒介导组生长抑制效应较脂质体转染组更强。流式细胞分析可见野生型PTEN基因转染细胞G0-G1期比例明显增加，凋亡率增加。MTT法发现，A549/DDP细胞对顺铂的半数抑制浓度IC50为（193.8±21.3）μmol/L；经脂质体介导的野生型PTEN基因转染A549/DDP细胞72小时后，细胞对顺铂的IC50降为（120.3±11.5）μmol/L；而经磁性纳米颗粒介导的野生型PTEN基因转染72小时后，A549/DDP细胞对顺铂的IC50降为（72.8±10.9）μmol/L。 结论:1.磁性纳米颗粒polyMAG-1000可介导野生型PTEN基因转染A549/DDP细胞，其转染效率明显高于脂质体介导的转染，且较之更加持续稳定的表达。磁性纳米颗粒转运体系在转染的剂量及作用时间下无明显的细胞毒性。2.野生型PTEN基因转染可抑制耐顺铂肺腺癌细胞的生长，这种抑制作用与PTEN引起细胞周期G1期阻滞和细胞凋亡有关；野生型PTEN基因转染可较大程度提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

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论文说明：缩略词表

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前言

第一章磁性纳米颗粒介导PTEN基因转染耐顺铂肺腺癌细胞可行性研究

1.1材料试剂

1.1.1主要实验仪器

1.1.2主要材料与试剂的配制

1.2方法

1.2.1质粒的制备

1.2.2细胞的接种与培养

1.2.3基因转染试验

1.2.4流式细胞仪检测转染效率

1.2.5 RT-PCR检测PTEN mRNA的表达

1.2.6免疫组织化学检测细胞内蛋白的表达

1.2.氧化镁磁性纳米颗粒转运体系的细胞毒性实验(MTT)

1.2.8统计学分析

1.3结果

1.3.1质粒的制备

1.3.2基因转染实验

1.3.3流式细胞仪检测转染效率

1.3.4 RT-PCR检测PTENmRNA的表达

1.3.5细胞免疫化学检测PTEN蛋白的表达

1.3.6纳米颗粒转运体系的细胞毒性实验(MTT)

1.4讨论

结论

第二章磁性纳米颗粒介导野生型PTEN基因转染对耐顺铂肺腺癌细胞生长及耐药的影响

2.1材料试剂

2.1.1主要实验仪器

2.1.2主要实验材料和试剂

2.2方法

2.2.1 MTT法检测野生型PTEN基因转染对A549/DDP生长影响的比较

2.2.2流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡

2.2.3 MTT法检测A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数。

2.2.4 MTT法检测野生型PTEN基因转染对A549/DDP细胞对顺铂的耐药性影响

2.2.5统计学分析

2.3结果

2.3.1 MTT法检测野生型PTEN基因转染对A549/DDP生长影响的比较

2.3.2流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡

2.3.3 MTT法检测A549/DDP对顺铂的耐药指数

2.3.4 MTT法检测野生型PTEN基因转染对A549/DDP细胞对顺铂的耐药性影响

2.4讨论

结论：

参考文献

综述 PTEN研究进展

致谢