母爱剥夺与慢性温和应激对大鼠抑郁样行为的影响及纹状体par-4基因表达的甲基化调控机制研究

摘要

目的：研究母爱剥夺和慢性温和应激对大鼠抑郁样行为、纹状体前列腺凋亡反应蛋白-4(prostate apoptosis response-4，par-4)mRNA及蛋白质表达的影响，探索基因甲基化是否参与par-4基因表达的调控。
　　 方法：SD大鼠按窝别随机分为母爱剥夺组(n＝17)、慢性应激组(n＝17，)、双重应激组(n＝10)和对照组(n＝17)。母爱剥夺组大鼠接受母爱剥夺应激，慢性应激大鼠组接受慢性温和应激，双重应激大鼠组接受母爱剥夺应激和慢性温和应激，对照组大鼠不接受任何实验性处理。在大鼠13周龄时采用糖水偏爱实验、强迫游泳实验和旷场实验评定其焦虑、抑郁水平；采用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测纹状体par-4及多巴胺D2受体(dopamine receptor D2，DRD2) mRNA表达水平；采用免疫印迹法(Western Blot)检测纹状体par-4蛋白质表达水平；采用亚硫酸盐法处理基因组DNA，连接T载体后克隆测序检测par-4基因启动子区DNA甲基化水平。
　　 结果：
　　 1.行为学实验结果发现：与对照组相比，母爱剥夺组大鼠糖水偏爱率降低，漂浮时间延长，爬行总路程及直立次数减少(P＜0.05)；中央格比例及大便颗数与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。慢性应激组与对照组相比糖水偏爱率降低，漂浮时间延长，直立次数减少(P＜0.05)；中央格比例、大便颗数及爬行总路程与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。双重应激组与对照组相比，漂浮时间延长，直立次数减少(P＜0.05)；糖水偏爱率、爬行总路程、中央格比例、大便颗数与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。
　　 2.基因表达检测结果发现：母爱剥夺组、慢性应激组、双重应激组大鼠的纹状体par-4及DRD2 mRNA表达水平相对于对照组均显著降低(P＜0.05)。母爱剥夺组、慢性应激组和双重应激组大鼠相对于对照组大鼠的par-4 mRNA表达量分别为0.53、0.33和0.61，相对于对照组的DRD2 mRNA表达量分别为0.31、0.33和0.54。且par-4 mRNA表达水平与糖水偏爱率、漂浮时间、总路程、大便颗数、直立次数相关显著(r值分别为0.408，0.537，0.504，0.478，0.464，P＜0.05)；与中央格比例相关不显著(r＝0.155，P＞0.05)。而DRD2 mRNA表达水平与与漂浮时间、总路程、直立次数相关显著(r值分别为0.390，0.389，0.400，P＜0.05)；与糖水比例、中央格比例及大便颗数相关不显著(r值分别为0.133，0.070，0.094，P＞0.05)。四组大鼠纹状体par-4蛋白质表达水平差异显著(F＝14.597，P＝0.000)，母爱剥夺组、慢性应激组、双重应激组大鼠纹状体par-4蛋白表达量相对于对照组大鼠显著降低(P＜0.05)，慢性应激组和双重应激组par-4蛋白表达量低于母爱剥夺组(P＜0.05)。
　　 3.克隆测序结果：四组大鼠的par-4基因启动子区总体甲基化水平组间差异不明显(F＝1.079，P＝0.359)；但以CG位点来统计时发现，有四个位点的甲基化水平组间差异显著(F值分别为3.103，3.605，6.862，5.196，P＜0.05)；慢性应激组有3个CG位点的甲基化水平高于对照组(P＜0.05)，并有1个CG位点的甲基化水平低于对照组(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1.母爱剥夺、慢性温和应激和双重应激能使大鼠产生抑郁样行为。
　　 2.母爱剥夺、慢性温和应激及双重应激均能使大鼠纹状体中par-4及DRD2 mRNA表达水平降低，降低程度与行为学指标相关。母爱剥夺、慢性温和应激及双重应激均能使大鼠纹状体par-4蛋白质表达水平降低。
　　 3.基因甲基化可能不是par-4基因表达下降的主要调控机制。