卡介苗对哮喘小鼠肺组织中PPAR-γ表达的影响及意义

摘要

支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病，其疾病的发生发展由多种细胞包括气道炎症细胞、结构细胞(如嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞和气道上皮细胞等)和细胞组分参与。过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPAR-γ)是一种核受体超家族中的转录因子，其配体包括类固醇、维生素D、甲状腺激素、维甲酸受体等。以往的研究表明，PPAR-γ是调节脂肪细胞分化和脂类代谢的重要受体。最近研究发现，PPAR-γ在炎性细胞、呼吸道上皮、支气管黏膜下层、呼吸道平滑肌均有表达，具有抑制炎症、诱导细胞分化、抑制增殖、诱导凋亡等作用。PPAR-γ相关信号通路在急性肺损伤、慢性肺炎症、肺动脉高压、肺纤维化中发挥重要的调节作用。PPAR-γ激动剂通过作用于嗜酸粒细胞、T淋巴细胞、树突状细胞、肺上皮细胞等，能够减轻过敏性哮喘小鼠呼吸道炎症。卡介苗(BCG)是结核杆菌培养230代后得到的减毒活疫苗，主要用于防治结核。众多研究表明卡介苗在哮喘及变应性疾病中起重要的免疫调节作用，能够诱导机体产生，Th1免疫反应，上调Th1反应，抑制Th2细胞功能，其机制可能与BCG诱导IFN-γ产生，降低IL-4、IL-5水平等相关。而卡介苗干预对PPAR-γ在哮喘小鼠肺组织表达产生影响及意义国内外鲜见报道。
　　 目的：通过建立小鼠哮喘模型，给小鼠进行治疗性接种BCG，观察BCG对哮喘小鼠肺组织中PPAR-γ表达的影响及可能的临床意义。
　　 方法：24只雄性昆明小鼠随机分成正常对照组(A组)，哮喘模型组(B组)，BCG治疗组(C组)。通过卵清蛋白致敏建立哮喘模型。观察3组小鼠的一般情况；肺泡灌洗液的细胞分类；肺组织的病理切片；用RT-PCR和western blotting方法检测肺组织中PPAR-γ mRNA和蛋白的表达。
　　 结果：
　　 1.BALF检查显示：
　　 哮喘模型组(B组)与正常对照组(A组)比较，BALF中白细胞总数、中性粒细胞数、嗜酸性粒细胞数、淋巴细胞数和巨噬细胞数比例均明显升高(P<0.01)。BCG治疗组(C组)与哮喘模型组(B组)比较，BCG均能明显降低BALF中白细胞总数、中性粒细胞数、嗜酸性粒细胞数和淋巴细胞数比例(P<0.05)。
　　 2.病理检查显示：
　　 病理学HE染色发现：正常对照组(A组)小鼠肺内几乎无炎性细胞浸润；而哮喘模型组(B组)小鼠肺内可见大量炎性细胞浸润，其炎性细胞浸润程度与正常对照组(A组)比较明显增加(P<0.01)。BCG接种后，炎性细胞浸润程度较哮喘模型组(B组)明显降低(P<0.05)。
　　 3.RT-PCR结果显示：
　　 正常对照组(A组)小鼠肺组织中PPAR-γ mRNA高水平表达，哮喘模型诱导成功后，哮喘模型组(B组)小鼠肺组织中PPAR-γ mRNA表达水平显著降低(P<0.01)，而BCG治疗后，与哮喘模型组比较，BCG治疗组(C组)小鼠肺组织中PPAR-γ mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。
　　 4.Weatern blotting结果显示：
　　 正常对照组(A组)小鼠肺组织中高表达PPAR-γ蛋白，哮喘模型诱导成功后，哮喘模型组(B组)小鼠肺组织中PPAR-γ蛋白表达水平显著降低(P<0.01)，而BCG治疗后，与哮喘模型组比较，BCG治疗组(C组)小鼠肺组织中PPAR-γ蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。
　　 5.相关分析显示：
　　 哮喘模型组(B组)小鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数百分比与气道炎症呈显著正相关(r=0.934，P<0.01)；哮喘模型组(B组)小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体PPAR-γ蛋白表达量与气道炎症呈显著负相关(r=-0.954，P<0.01)，与肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数百分比呈显著负相关(r=-0.900，P<0.01)。
　　 结论：
　　 1.在支气管哮喘小鼠模型中，肺组织中PPAR-γ表达明显降低，并与气道炎症呈负相关。
　　 2.BCG治疗后哮喘小鼠肺组织中PPAR-γ表达明显增高，BALF中白细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例减少。
　　 3.BCG可通过上调表达PPAR-γ，激活PPAR-γ信号通路，减少炎症细胞的浸润，抑制炎症反应，从而可能防止气道重塑。