皮质抑素在寻常型银屑病中的表达及外源性皮质抑素对EGF诱导的HaCaT细胞增殖模型的影响

摘要

目的:检测皮质抑素(CST)在寻常型银屑病病人血浆及皮肤中的表达,并在表皮生长因子(EGF)诱导的HaCaT细胞增殖模型中观察外源性应用CST对HaCaT细胞增殖的影响,初步探讨CST在银屑病发病机制中的作用。
　　 方法:
　　 1.ELISA法检测72例寻常型银屑病和76例正常对照组血浆中的CST的表达,免疫组化方法检测14例银屑病病人(取自上述72例中)皮损区及正常对照皮肤中的CST的表达。
　　 2.1×106/孔HaCaT细胞种六孔板,培养24小时后,细胞免疫组化方法检测HaCaT中CST蛋白的表达,RT-PCR方法检测CSTmRNA的表达。
　　 3.按5000/孔接种HaCaT细胞至96孔板,待细胞贴壁后,换含10ng/ml EGF的RPMI-1640培基,外源性给予不同浓度的CST(10-9-10-6M)处理含10 ng/ml EGF的HaCaT细胞24小时,MTT法检测细胞增殖的改变,重复三次,观察外源性CET对EGF诱导的HaCaT细胞增殖的影响并选取最佳皮质抑素浓度进行后续实验。
　　 4.细胞免疫组化方法检测无CST和EGF的HaCaT细胞组(空白组),含10 ng/ml EGF的HaCaT细胞组(对照组)及含10-6M CST和10 ng/ml EGF的HaCaT细胞组(实验组)三组中增殖指标Ki-67的变化。
　　 5.酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测以上三组的第二信使cAMP的变化。
　　 结果:
　　 1.银屑病病人血浆及皮损中皮质抑素的表达较正常对照组均显著下降,但银屑病病人血浆CST表达水平与PASI积分无显著相关性。
　　 2.CST蛋白在HaCaT细胞胞浆中有表达。且CSTmRNA(173bp)在HaCaT细胞有表达。
　　 3.不同浓度CST(10-9-10-6 M)呈浓度依赖性抑制10 ng/ml的EGF诱导的HaCaT细胞的增殖。在10-6M时有最好的抑制效应,抑制率54.62％。
　　 4.Ki-67在10 ng/ml EGF处理的HaCaT细胞组(对照组)中表达较空白组增高,而10-6M CST处理后,Ki-67表达下调。
　　 5.第二信使cAMP与Ki-67变化一致。
　　 结论:
　　 (1)寻常型银屑病患者皮损及血浆中CST较正常对照组表达降低可能参与银屑病的发病。
　　 (2)外源性CST可以抑制EGF诱导的HaCaT细胞增殖。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略语表

前言

第一章 材料和方法

1.1 病例收集

1.2 细胞来源

1.3 主要试剂和仪器

1.3.1 主要试剂

1.3.2 主要仪器

1.4 方法

1.4.1 主要试剂的配制

1.4.2 实验方法

1.5 统计方法

第二章 结果

第三章 讨论

结论

参考文献

综述:皮质抑素在免疫系统及肿瘤中的功能

致谢

攻读学位期间主要的研究成果