非小细胞肺癌组织中EGFR基因突变及信号传导蛋白AKT、ERK磷酸化的表达及临床意义

摘要

目的：
　　 检测非小细胞肺癌组织中表皮生长因子受体(Epidermal GrowthFactor Receptor,EGFR)突变和EGFR下游关键蛋白丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(蛋白激酶B)(protein kinase B,PKB,AKT)及磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular signal-regulated kinase,ERK)磷酸化表达,研究上述变化与性别、年龄、吸烟及预后等临床因素之间的关系。为非小细胞肺癌个体化靶向治疗的研究提供新的依据。
　　 方法：
　　 (1)收集湘雅医院2003年9月至2010年7月间手术切除并经病理确诊的原发性非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Carcinoma,NSCLC)病例103例,冰冻和福尔马林分别保存活检组织。所有入选患者术前均未接受过化疗或放疗等任何抗肿瘤治疗。
　　 (2)收集所有患者的临床病理资料,并对患者进行电话或通信随访,获得随访资料。
　　 (3)将标本解冻后对所有的肿瘤组织用PCR-直接测序法(PCRand direct sequencing method)检测肺癌组织中EGFR基因第19和21外显子突变:免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-peroxidase,S-P)检测肺癌组织中的p-AKT、p-ERK蛋白表达。
　　 (4)对病例资料、实验结果、生存分析应用SPSS17.0软件进行统计学分析,P＜0.05为差异有统计学意义。
　　 结果：
　　 (1)EGFR基因突变情况:PCR扩增产物测序结果显示突变的肿瘤组织DNA中可同时检测出突变序列和野生型序列。103例NSCLC患者肿瘤组织中共有34例存在EGFR基因突变。其中,19号外显子突变有4种突变类型均为缺失突变,突变数为24例。第21号外显子突变均为第2573位点突变(L858R),突变数为10例。在性别、年龄、原发病灶、区域淋巴结分期、远处转移和国际分期中不同的病例组中EGFR基因突变的表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。在不同的吸烟史及病理学类型的病例的表达差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 (2)EGFR下游信号传导蛋白AKT磷酸化的表达结果:p-AKT表达总阳性率为56.3％,EGFR突变患者中p-AKT阳性率(44.8％)显著高于无突变者的阳性率(17.8％),差异有统计学意义(P＜0.05);在性别、年龄、原发病灶、区域淋巴结分期、远处转移和国际分期病例中不同的病例中p-AKT的表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。在不同的吸烟史及病理学类型的病例的表达差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 (3)EGFR下游信号传导蛋白ERK磷酸化的表达结果:p-ERK的表达阳性率为30.1％,在不同的性别、吸烟史、原发病灶和国际分期病例中p-ERK的表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。在年龄、区域淋巴结分期、远处转移及病理学类型不同的病例中的表达差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 (4)EGFR基因突变和AKT、ERK磷酸化的表达不同的患者总生存(Overall survival,OS)差异均无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论：
　　 1.非小细胞肺癌组织中存在EGFR基因突变,并且信号传导通路下游关键分子AKT及ERK磷酸化呈高表达。
　　 2.吸烟可能使EGFR的19和21位点的基因突变率降低和EGFR的下游关键蛋白AKT的磷酸化增加。
　　 3.ERK磷酸化的表达提示非小细胞肺癌的恶性度高,易发生侵袭和转移,但生存分析未显示ERK磷酸化的表达与OS存在相关性。
　　 4.非小细胞肺癌EGFR基因突变、AKT磷酸化表达与OS无明显相关;但EGFR基因突变与AKT磷酸化的表达相关,提示EGFR基因突变对NSCLC肿瘤组织中PI3K-PKC-IKK信号通路中关键蛋白AKT磷酸化有影响。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词简表

第一章 前言

第二章 材料与方法

1.材料与主要试剂与仪器

2.实验方法与步骤

3.统计学处理

第三章 结果

1.EGFR基因突变的结果

2.免疫组化结果

3.病理学资料及随访的临床结果

4.EGFR基因突变、AKT和ERK蛋白的磷酸化的表达与临床因素的关系

5.EGFR基因突变和AKT、ERK磷酸化表达的关系

6.EGFR基因突变、AKT和ERK磷酸化表达与患者预后的关系

第四章 讨论

1.EGFR基因突变

2.AKT蛋白磷酸化的表达

3.ERK蛋白磷酸化的表达

第五章 结论

参考文献

附图

综述:EGFR基因的突变及下游蛋白p-AKT、p-ERK的表达在非小细胞肺癌靶向治疗中的研究进展

致谢

攻读硕士期间主要的研究成果