非小细胞肺癌的EGFR基因突变与扩增状况及信号传导蛋白AKT、ERK、STAT磷酸化表达

摘要

目的：
　　检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与扩增状况及其下游信号通路蛋白的磷酸化表达，分析它们之间的相互关系,研究它们与临床病理特征之间的关系，探讨它们在酪氨酸激酶抑制剂（TKI）适宜人群遴选中的作用。
　　方法：
　　收集2010年6月至2011年3月手术治疗的非小细胞肺癌患者标本64例。所有患者均为福建籍，术前均未接受过化放疗和EGFR-TKI治疗。利用PCR和基因测序检测EGFR第19、21外显子突变；FISH法检测EGFR基因扩增；EliVisionTM plus两步法免疫组织化学染色检测EGFR下游信号传导蛋白p-Akt、p-ERK1/2和p-STAT3的阳性表达。
　　结果：
　　（1）EGFR基因突变与扩增情况
　　64例NSCLC标本的EGFR基因突变率28.1％（18/64），其中外显子19突变率15.6%（10/64），DelE746-A750型突变占9例，另1例为Del L746-P752insV突变；外显子21突变率12.5%（8/64），均为L858R型突变。EGFR基因突变率在女性及吸烟指数低者中显著增高（P<0.05），腺癌患者EGFR基因突变率也高于非腺癌患者（但本组未发现统计学差异）；在不同年龄及临床分期中未发现统计学差异。
　　64例NSCLC标本FISH检测阳性率56.3%（36/64），其中高度多倍体性扩增率39.1%（25/64）、基因扩增率17.2%（11/64）。在不同年龄、性别、组织学类型及吸烟指数的患者中均未发现FISH（+）率的统计学差异。
　　EGFR基因突变与EGFR基因扩增有明确的相关性。有EGFR基因突变的患者，其EGFR基因扩增率显著增高（77.8%vs47.8%,p<0.05）；同样，有EGFR基因扩增的患者，其EGFR基因突变率也显著增高(38.9% vs14.3%, p<0.05）。
　　（2）EGFR下游信号通路蛋白的磷酸化
　　64例NSCLC标本中p-Akt阳性表达率为64.1%（41/64）,在腺癌、吸烟指数低和有EGFR基因突变的患者中显著增高（P<0.05）,女性患者的阳性率也较男性增高（但在本组未发现统计学差异）。
　　64例NSCLC标本的p-ERK1/2阳性率25.0%（16/64），其表达在不同年龄、性别、病理类型、肿瘤分期、吸烟指数及EGFR突变状况的患者中没有统计学差异。
　　64例NSCLC标本的p-STAT3的阳性表达率为40.6%（26/64），在早中期及有EGFR基因突变的患者中显著增高（P<0.05），在不同年龄、性别、病理类型、吸烟指数的患者中没有统计学差异。
　　（3）EGFR基因突变或扩增与下游信号通路蛋白磷酸化的关系
　　有EGFR基因突变的标本，其p-AKT和p-STAT3阳性表达率显著增高（P值均<0.05）,但p-ERK1/2的阳性表达率无统计学差异。
　　有EGFR基因扩增的标本，其p-AKT阳性表达也显著增高，但p-STAT3和p-ERK1/2阳性表达率无统计学差异。
　　结论：
　　1、NSCLC标本EGFR外显子19、21的突变率及p-Akt阳性表达在女性、腺癌、吸烟指数低者中明显增高，与临床EGFR-TKI优势人群相符，提示两者是临床遴选EGFR-TKI适宜人群的重要参考指标。
　　2、EGFR基因扩增率及p-ERK、p-STAT3的阳性表达率在不同临床病理特征间未发现统计学差异，提示可能均不适宜作为TKI适宜患者遴选的独立指标。
　　3、有EGFR基因突变的NSCLC标本，p-AKT和p-STAT3阳性表达率明显增高，从标本水平证实了EGFR基因突变对PI3K/Akt和JAKs/STATs信号转导通路存在选择性激活。

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图表目录

中文摘要

英文摘要

缩略词简表

第一章 前 言

第二章 实 验 内 容

1 标本来源与处理

2 EGFR基因19、21外显子突变检测

3 EGFR基因扩增检测

4 EliVisionTM plus两步法免疫组织化学染色检测p-Akt、p-ERK1/2 和p-STAT3的表达

5 统计学处理

第三章 结 果

1 临床资料

2 EGFR基因突变与扩增状况

3 EGFR下游通路蛋白磷酸化检测状况

4 EGFR基因状态与信号通路蛋白磷酸化的关系

第四章 讨 论

1 EGFR基因突变

2 EGFR基因扩增

3 EGFR下游信号通路蛋白的磷酸化

第五章 结 论

参 考 文 献

参考文献

博士学业期间取得的主要成绩

致谢