日本血吸虫童虫细胞高保护性免疫学机制的初步研究

摘要

第一章S.j童虫活细胞与UV致弱尾蚴免疫诱生的保护性差异
　　 [目的]以两种日本血吸虫易感小鼠为动物模型，比较日本血吸虫（S.j）童虫细胞型疫苗和UV致弱尾蚴疫苗所诱导的保护性差异。[方法]细胞型疫苗的制备:用S.j尾蚴感染家兔后收集12d童虫，酶消化法制备童虫活细胞作为免疫原。动物分组:取40只雌性昆明鼠和40只雌性Balb/c鼠随机分为8组。D1组:童虫细胞免疫昆明鼠组;E1组:UV致弱尾蚴免疫昆明鼠组;F1组:PBS注射昆明对照组;F1'组:NS腹部贴片昆明对照组;D2组:童虫细胞免疫Balb/c组;E2组:UV致弱尾蚴免疫Balb/c组;F2组:PBS注射Balb/c对照组;F2'组:NS腹部贴片Balb/c对照组。动物免疫及攻击:D1组和D2组每鼠经后腿双侧腹股沟皮下注射接种免疫原，隔2周一次，共免疫3次，F1和F2组每鼠注射PBS;用紫外照射致弱处理S.j尾蚴，按400尾致弱尾蚴/鼠贴片法免疫E1、E2组小鼠各一次，而F1'组和F2'组则贴沾有生理盐水的玻片一次;于末次细胞免疫后第2周或致弱尾蚴免疫第6周用30±1尾/鼠正常尾蚴对各组小鼠进行攻击感染。于感染后第42d剖杀小鼠，计数各鼠虫荷、每克肝卵荷(liver eggs pergram，LEPG)，测量经HE染色后的肝虫卵肉芽肿的大小。[结果]昆明鼠中，D1组获得了45.9％的减虫率和62.9％LEPG减少率，肝虫卵肉芽肿平均直径和面积分别减少39.6％和63.7％; E1组获得53.3％的减虫率和62.4％LEPG减少率，肝虫卵肉芽肿平均直径和面积分别减少42.7％和67.2％;两免疫组相比较显示，E1组的减虫率明显高于D1组(P＜0.05)，但其余指标均无明显差异(P＞0.05);在Balb/c鼠实验中，D2组获得了56.3％的减虫率和57.1％LEPG减少率，肝虫卵肉芽肿平均直径和面积分别减少42.4％和66.9％; E2组获得49.5％的减虫率和42.7％LEPG减少率，肝虫卵肉芽肿平均直径和面积分别减少31.4％和52.9％;两免疫组相比较显示，D2组的各项指标均高于E2组（P＜0.05）。[结论]S.j童虫细胞免疫和UV致弱尾蚴免疫均能诱导两易感株鼠产生理想的保护性效果，并且童虫细胞免疫能够产生同等甚至高于致弱尾蚴的保护效果。
　　 第二章S.j童虫活细胞免疫与UV致弱尾蚴免疫诱导小鼠产生保护性机制分析
　　 [目的]通过探讨S.j童虫细胞免疫和UV致弱尾蚴免疫诱导的免疫应答特点，分析和比较S.j童虫细胞免疫和UV致弱尾蚴免疫诱导高保护性机制。[方法]实验的分组同第一章，间接ELISA检测各组鼠血清中抗S.j可溶性童虫抗原(soluble juvenile worm antigens，SJWA)的IgG、IgG1、IgG2a抗体水平[结果]ELISA结果显示:在昆明组中，D1组和E1组均产生了明显高于对照组的抗SJWA-IgG水平，在第一次免疫到攻击感染之间，D1组产生的IgG水平显著高于E1组（P＜0.05），而在攻击感染后，E1组的IgG水平上升的更快，并且在12w显著大于D2组（P＜0.05），D1组和E1组均产生了较高抗SJWA的IgG1和IgG2a水平，并且D1、E1的IgG2a/IgG1的比值均大于1，D1的IgG2a/IgG1比值由攻击感染前的2.03下降到1.81，而E1的IgG2a/IgG1由攻击感染前的1.73上升至2.23;Balb/c鼠实验中，D2组和E2组同样均产生了明显高于正常对照组的抗SJWA-IgG水平，在攻击前两免疫组IgG水平并无显著性差异（P＞0.05），在攻击感染后D2组的IgG水平逐渐高于E2组（P＞0.05），两免疫组血清中的IgG2a和IgG1均有较大的升高，IgG2a升高的更未明显(IgG2a/IgG1＞1)，E2组的IgG2a/IgG1比值在攻击感染后有一定的上升，而D2组的并无显著变化。[结论]Sj童虫细胞免疫和UV致弱尾蚴免疫均能诱导两组不同的易感小鼠产生较高的抗攻击感染免疫应答水平，IgG1和IgG2a水平增高以及IgG2a/IgG1比值提示两免疫均能产生以细胞免疫为主的混合免疫反应。
　　 第三章S.j血吸虫童虫活细胞免疫母鼠的子代抗攻击感染保护性研究
　　 [目的]以两种日本血吸虫易感小鼠为动物模型，探讨S.j童虫细胞免疫母鼠的子代鼠抗日本血吸虫攻击感染的应答水平。[方法]用S.j童虫细胞分别免疫昆明母鼠和Balb/c母鼠，将免疫母鼠或正常母鼠与相应鼠种的正常公鼠配对饲养，用其子代鼠建立两个感染模型共4组（A1:免疫昆明子代组;B1:正常昆明子代对照组;A2:免疫Balb/c子代组;B2:正常Balb/c子代对照组）;计数四组鼠经S.j尾蚴攻击感染后获得的虫荷和LEPG;测量小鼠经HE染色后的肝组织切片内虫卵肉芽肿的大小;间接ELISA检测各组子代鼠血清中抗SJWA-IgG水平。[结果]与正常子代组相比，两组S.j童虫活细胞免疫母鼠子代均表现出不同程度的抗攻击感染的免疫力，尤其抗生殖效果显得尤为突出。其中，A1获得35.6％的减虫率和59.4％的LEPG减卵率;A2获得29.8％的减虫率和47.4％的LEPG减少率。从肝脏外表来看，B1、B2组子代对照鼠肝脏的坏死程度明显高于A1、A2免疫子代鼠。此外，A1组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积比B1组分别减少23.8％和43.4％，A2组肝脏虫卵肉芽肿平均直径和面积较B2组减少28.4％和50.3％。A1、A2与B1、B2各指标结果的组间差异均具有统计学意义(P＜0.05）。ELISA结果显示，不同时间点采集的两株免疫子代鼠血清中的IgG水平高于同期相应对照组血清中的IgG水平。[结论]用S.j童虫细胞接种母鼠所诱生的保护性免疫有可能在胚胎期经母体传给子代，并诱导子代胚胎中的早期免疫细胞（或免疫相关干细胞）形成特定的免疫记忆，进而使子代鼠产生针对后天初次感染的保护性免疫。

目录

声明

摘要

缩略词

前言

第一章 S.j童虫活细胞与UV致弱尾蚴诱导小鼠产生的保护性效果差异

1 材料与方法

1．1 钉螺和动物

1．2 主要仪器

1．3 主要试剂及试剂(盒)

1．4 童虫细胞的制备

1．5 实验分组及动物免疫

1．6 尾蚴攻击感染及寄生虫学指标检测

1．7 统计分析

2 结果

2．1 减虫率和每克肝卵减少率

2．2 肝脏外貌特征

2．3 肝脏肉芽肿观察

3 讨论

第二章 S.j童虫活细胞与UV致弱尾蚴诱导小鼠产生保护性体液免疫机制的差异分析(1)

1 材料与方法

1．1 钉螺和实验动物

1．2 主要仪器

1．3 主要试剂及试剂(盒)

1．4 童虫细胞的制备

1．5 免疫动物及实验分组

1．6 童虫可溶性抗原的制备

1．7 血清采集及抗体检测

1．8 统计分析

2 结果

2．1 血清中抗SJWA动态水平

2．2 IgG亚类抗体水平变化

3 讨论

第三章 S.j童虫活细胞免疫母鼠子代具有一定水平的抗攻击感染的保护性

1 材料与方法

1．1 钉螺和动物

1．2 主要仪器及试剂(盒)

1．2 童虫细胞的制备

1．3 免疫动物及实验分组

1．4 尾蚴攻击感染及寄生虫学指标检测

1．5 童虫可溶性抗原的制备

1．6 抗体水平的检测

1．7 统计分析

2 结果

2．1 减虫率和每克肝卵减少率

2．2 肝脏外貌特征

2．3 肝脏肉芽肿观察

2．4 抗体水平变化

3 讨论

结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间主要的研究成果