脾切除对肝纤维化大鼠肝脏CTGF的表达及血清CTGF水平的影响

摘要

目的: 本课题研究脾切除对肝纤维化大鼠肝脏CTGF的表达和血清CTGF水平的影响，从而探讨脾切除在肝纤维化治疗中的可能作用。
　　 方法: 雄性清洁级SD大鼠80只，随机分为正常对照组8只和模型组72只。对模型组大鼠皮下注射CCL4，建立72例肝纤维化大鼠模型。模型组大鼠随机分成三大组，分别于建模开始，建模第5周，及建模第10周切除大鼠脾脏，并设立同期假手术组作为对照组。第一、二组及其对照组于建模后第10周，第三组及其对照组于建模后14周分别取大鼠肝脏和血液标本。用HE染色检测肝纤维化程度，免疫组化方法测定肝脏CTGF的表达，应用HPIAS-1000电脑彩色图像系统对阳性目标进行定量分析，应用双抗体夹心ELISA方法测定血清CTGF水平。
　　 结果:
　　 (1) CTGF阳性物质主要位于肝间质细胞的胞浆内，呈棕黄色。 CTGF阳性染色部位主要分布在汇管区、纤维间隔、炎症区，少数在肝窦内。
　　 (2)正常组大鼠和不同纤维化时期大鼠肝脏CTGF的吸光度值分别为:0.016±0.007,0.108±0.011,0.159±0.008;正常组大鼠和不同纤维化时期大鼠血清CTGF(ng/ml)含量分别为:3.211±0.225,11.91±0.595,22.008±2.308。统计结果均表明，随着肝纤维化的进展，大鼠肝脏及血清CTGF含量逐渐增加(P＜0.01)。
　　 (3)不同时期切脾组大鼠血清CTGF的水平分别为(ng/ml):7.064±0.326,12.245±0.448,17.001±0.252;而同期假手术组其血清CTGF的水平分别为(ng/ml):20.925±1.023，22.356±1.285，23.129±1.221。实验结果表明，各切脾组血清CTGF含量明显低于其同期假手术组(p＜0.05)。
　　 (4)根据HE染色结果，建模开始时切脾再行肝纤维化诱导，肝纤维化进程缓慢;建模后第5周切脾，肝脏病理状态比对照组明显缓解;建模后第10周切脾，肝脏炎性改变和纤维化程度有一定减轻。
　　 (5)不同时期切脾大鼠肝脏CTGF的阳性细胞吸光度值（A值）分别为:0.049±0.011，0.072±0.013，0.098±0.018;而同期假手术组CTGF阳性细胞A值分别为:0.157±0.035，0.165±0.012，0.182±0.029。结果表明，各切脾组肝脏CTGF阳性细胞A值明显低于其对照组(p＜0.05)。
　　 (6)模型组中各手术组大鼠肝脏及血清CTGF的含量采用单因素方差分析q检验进行均数的两两比较表明，切脾时间越早，肝脏及血清CTGF的含量越低，切脾时间对CTGF的降低有影响(p＜0.05)。
　　 结论:
　　 (1)随着肝纤维化程度的进展，大鼠肝脏及血清CTGF的阳性表达逐渐增强。
　　 (2)脾脏切除能降低肝纤维化大鼠肝脏CTGF的表达以及血清中CTGF的水平，有助于缓解肝纤维化程度。
　　 (3)肝纤维化进程中早期切脾对延缓肝纤维化进展有一定的作用。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 实验动物

2．2 主要试剂

2．3 主要实验仪器

2．4 实验方法

2．4．1 实验动物分组

2．4．2 造模方法

2．4．3 大鼠脾脏切除

2．4．4 标本采集及处理

2．4．5 肝脏标本HE染色

2．4．6 大鼠肝脏标本的免疫组化染色

2．4．7 大鼠血清CTGF浓度的测定

2．5 统计分析方法

第三章 结果

3．1 大鼠肝纤维化造模结果

3．2 各手术切脾组及同期对照组肝脏HE染色结果

3．3 CTGF的表达和分布

3．4 CTGF在肝脏表达的定量分析

3．5 CTGF在血清表达的定量分析

第四章 讨论

4．1 CTGF与肝纤维化

4．2 脾切除与肝纤维化

第五章 结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间主要的研究成果