类风湿性关节炎动物模型的建立及其HMBG1分布与表达研究

摘要

目的：探讨牛Ⅱ型胶原(CⅡ)给药剂量对建模成功率的影响，并检测HMGB1在正常对照组及实验组SD大鼠滑膜中分布与表达情况。
　　 方法：以牛CⅡ与不完全弗氏佐剂(IFA)制成混合乳剂，于SD大鼠背部及尾根部多点皮内注射诱导类风湿性关节炎(RA)动物模型即胶原性关节炎(CIA)模型。将48只雄性SD大鼠分别编号后随机分成4组，考察0μg、200μg、300μg、400μg4个CⅡ剂量水平对建模成功率的影响。每周观察足部外观、测量体重和后足容积变化情况，进行关节炎症积分，测定关节炎指数(AI)，每两周采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中抗CⅡ抗体、TNF-α浓度，初次免疫后第3周和第6周末进行足部X片摄片，第6周末处死大鼠行病理H-E染色，以检查关节病变及骨质破坏情况。从中选取造模组成功的SD大鼠做为实验组，采用免疫组化酶标染色法检测其关节滑膜中HMGB1的分布与表达情况，并与正常对照组做比较。
　　 结果：发病SD大鼠可见体重增长缓慢，甚至下降，足跖垫增厚，踝关节肿胀，并有数量不等的跖、趾关节红肿，且活动迟缓。急性病变期受累足活动量明显减少，平均关节炎指数(AI)达5.15±1.82，其血清中抗CⅡ抗体、TNF-α浓度较对照组均升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。初次免疫后第6周末X线及病理形态学呈慢性滑膜炎表现，可见明显骨质破坏。由统计学分析可得知:建模成功率随CⅡ给药剂量的增加而上升，有统计学意义(P＜0.05)，400μg组建模成功率达100％。各种CⅡ剂量在建模过程中均未发生动物死亡现象。免疫组化染色显示正常对照组大鼠滑膜中HMGB1主要分布在胞核内，而CIA大鼠滑膜中HMGB1在胞核、胞质均有分布，且表达量较正常对照组增加。
　　 结论：1.牛Ⅱ型胶原可诱导产生类风湿性关节炎SD大鼠动物模型，且在200μg至400μg之间，增加给药剂量可提高建模成功率;
　　 2.在炎症情况下，SD大鼠滑膜中HMGB1分布广且表达量增加，提示其在类风湿性关节炎中可能具有重要的调控作用。

目录

声明

摘要

缩略词表

第一章 前言

第二章 材料和方法

2．1 实验动物

2．2 主要仪器

2．3 主要试剂

2．4 试剂配制

2．5 实验方法

2．6 统计学方法

第三章 结果

3．1 形态学观察

3．2 发病率分析

3．3 免疫学检测

3．4 影像学检测

3．5 病理学变化

3．6 HMGB1分析

第四章 讨论

4．1 动物模型的建立

4．2 动物模型的特点

4．3 HMGB1病理改变

4．4 HMGB1检测方法

4．5 HMGB1靶向治疗

第五章 结论

参考文献

综述

致谢