成纤维细胞生长因子受体阻滞剂对膀胱肿瘤细胞增殖和迁移的影响及机制研究

摘要

第一部分 FGFR抑制剂通过MAPK信号通路对T24细胞增殖和迁移的影响
　　目的:我国最常见的泌尿系统肿瘤是膀胱癌，在全部恶性肿瘤中约占3.2％，膀胱癌以尿路上皮细胞肿瘤为主，约占95％。膀胱癌会直接威胁患者生存。目前对于膀胱癌的药物治疗有很多，但是仍有一些不足。FGFR在膀胱上皮细胞中广泛存在，有研究表明其可能参与肿瘤细胞的生长。因此本研究旨在观察抑制FGFR是否可以有效抑制T24细胞的增殖和迁移，及其可能的信号通路。
　　方法:分别用不同浓度0、60、70、80μmol/LFGF受体抑制剂(sprouty)处理体外培养的膀胱癌T24细胞后，首先观察细胞数量、形态变化;迁移观察sprouty对膀胱癌细胞迁移能力的影响情况;膀胱癌T24细胞增殖的变化通过MTT比色法检测;通过Western blot检测sprouty作用后膀胱癌T24细胞ERK, P38，JNK磷酸化水平以及总蛋白表达情况;统计学方法:本研究采用SPSS17.0统计软件包进行统计学处理。用采用t检验对计量资料，x2检验对计数资料进行统计学分析，以p＜0.05为差异有显著意义。
　　结果:FGFR抑制剂（Sprouty）能明显抑制T24细胞增殖，细胞发生明显的皱缩，凋亡。MTT结果显示FGFR抑制剂处理膀胱癌细胞，细胞增殖具有剂量和时间依赖性，即随药物浓度升高(0-80μmol/L)和作用时间的延长(24-72h)而抑制作用增强。迁移观察sprouty对膀胱癌细胞迁移能力的影响，结果显示sprouty0、60、70、80μmol可以明显抑制细胞的迁移，并且随着作用浓度的增加而增加。进一步检查sprouty作用可能的信号通路，westernblot的结果显示，sprouty可以明显抑制ERK磷酸化水平，增加JNK磷酸化水平，而对于P38并无明显影响。
　　结论:FGFR抑制剂可能通过MAPK信号通路抑制T24细胞增殖和迁移。
　　第二部分 FGFR抑制剂对于膀胱肿瘤生长以及侵袭的影响
　　目的:肿瘤的形成是异型细胞过度增殖，转移。肿瘤细胞首先发生局部浸润，进而转移到其他组织，增加其侵袭性以及恶性程度，最终导致患者死亡。肿瘤细胞的局部浸润首先是肿瘤细胞之间的连接减弱，粘附力降低，肿瘤细胞与基底膜粘附降低，细胞外基质发生降解，由此肿瘤细胞通过降解空隙发生迁移。在第一部分已经证实了FGFR可以通过MAPK信号通路抑制T24细胞的增殖和迁移，在本节内容中进一步探讨FGFR抑制剂是否可以对于膀胱癌肿瘤生长以及侵袭产生相应的作用。
　　方法:选取BALB/C nu/nu裸鼠，共40只，4～6周龄，体重20g左右，恒温恒湿饲养，自由进食水。裸鼠在动物房适应3天后，即进行肿瘤细胞的局部注射。准备肿瘤细胞:取对数生长期的T-24细胞，调整活细胞浓度为5×106/ml，于每只裸鼠腹股沟皮下接种上述单细胞悬液0.2ml后，将裸鼠随机分为四组，每组10只，分别为对照组、bFGF组，sprouty组以及sprouty+bFGF共同作用组。并在第二天开始给药，腹腔注射1次/d，对照组注射等量生理盐水。培养T24细胞分别给予，与上述分组相同，给药12h后，观察MMPs的变化，并提取在体肿瘤细胞RNA，进一步观察MMPs mRNA水平的改变。
　　结果:bFGF具有明显的成瘤性，而FGFR抑制剂sprouty可以抑制肿瘤的生成，并且可以逆转bFGF对肿瘤生成的促进作用。bFGF可能通过调节MMPs的表达从而影响肿瘤细胞的侵袭，FGFR抑制剂sprotuy能抑制MMPs的表达，并且可以阻断bFGF对MMPs表达的调控作用。
　　结论:FGFR抑制剂可以有效抑制膀胱肿瘤生长以及侵袭，其抑制细胞迁移可能是通过调控MMPs mRNA水平。

目录

声明

摘要

主要英文缩写词汇表

前言

第一部分 FGFR抑制剂是否可以通过MAPK信号通路抑制T24细胞增殖和迁移

1 研究背景

2 材料与方法

2．1 主要仪器

2．2 主要试剂

2．3 主要试剂配伍

2．4 主要试验方法

2．5 统计学处理

3 结果

3．1 FGFR抑制剂处理后T24细胞形态的变化

3．2 FGFR抑制剂处理后T24细胞迁移的变化

3．3 FGFR抑制剂处理后T24细胞增殖的改变

3．4 FGFR抑制剂影响T24细胞增殖和迁移通过MAPK信号通路

4 讨论

5 结论

第二部分 FGFR抑制剂对于膀胱肿瘤生长以及侵袭的影响

1 研究背景

2 材料与方法

2．1 仪器和设备

2．2 相关试剂

2．3 主要实验方法

2．4 统计学处理

3 结果

3．1 FGFR抑制剂对裸鼠移植瘤的抑制作用

3．2 FGFR抑制剂逆转bFGF诱导的MMP-2和MMP-9 mRNA水平上调

4 讨论

5 结论

全文结论

参考文献

综述 FGF／FGFR信号通路---肿瘤治疗的新靶点

致谢

攻读学位期间主要的研究成果