含钌配合物的合成及其在比色法测定巯基化合物中的应用

摘要

巯基生物分子（如半胱氨酸和谷胱甘肽等）对维持生物体正常的生理功能起到十分重要的作用，许多疾病的发生都与这些物质的代谢失调有关。对生物样品中的巯基生物分子含量进行准确的测定，对于疾病的诊断及预防具有十分重要的意义。相较于其它分析方法，比色法检测巯基化合物的优势在于该法操作简单、分析速度快、实验花费低。近年来利用比色法检测巯基化合物的研究取得了很大的进展，许多染料都被用于巯基化合物的比色检测。最近，基于指示剂与分析物间竞争机制的指示剂置换比色法得到了较多的关注。含钌染料具有特殊的光学性质，它们在可见光区一般会有强吸收。本文以含钌染料N3（二硫氰酸基双（N，N'-2，2'-联吡啶-4，4'-二甲酸）钌）作为信号分子，建立了巯基化合物的竞争比色检测法。主要研究内容如下:
　　分别以2，2'-联吡啶及4，4'-二甲基-2，2'-联吡啶为原料，合成化合物二硫氰酸基双（N，N'-2，2'-联吡啶）钌及二硫氰酸基双（N，N'-2，2'-联吡啶-4，4'-二甲酸）钌（染料N3）。采用紫外光谱、核磁谱图及质谱对合成产物进行结构表征。
　　以染料N3作为指示剂，建立一种基于指示剂中异硫氰根与分析物的巯基对Hg2+竞争结合机制的指示剂置换比色法用于巯基化合物半胱氨酸(Cys)及谷胱甘肽(GSH)的检测。N3分子中含有异硫氰根，能与汞离子配位，而半胱氨酸与汞离子的配位作用强于N3染料，可夺取与N3配位的汞离子，使N3得以释放回到游离状态，颜色及光谱特征都得到恢复，记录该过程中溶液紫外-可见光谱图的变化可实现对巯基化合物的定量检测。该方法操作简单、响应时间快、稳定性好，溶液最大吸收峰变化值与Cys、GSH的浓度在0.5～25μM的范围内呈现良好的线性关系，检测限分别为57nM、52nM。此外，方法对其它氨基酸及氧化型谷胱甘肽表现出很好的选择性。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 巯基生物分子简介

1．2 巯基生物分子的检测方法

1．2．1 放射酶分析法

1．2．2 质谱法

1．2．3 高效液相色谱法

1．2．4 毛细管电泳法

1．2．5 荧光偏振免疫法

1．2．6 荧光法

1．2．7 紫外可见分光光度法

1．3 钌(Ⅱ)吡啶配合物在分析中的应用

1．3．1 与DNA相互作用研究

1．3．2 钉(Ⅱ)多吡啶配合物电致发光方法研究

1．3．3 阳离子发光传感器

1．3．4 阴离子发光传感器

1．4 本论文选题背景及意义

第二章 二硫氰酸基双(N，N’-2，2’-联吡啶)钌及其衍生物的合成

2．1 引言

2．2 主要实验试剂与仪器设备

2．3 实验方法

2．3．1 化合物的表征方法

2．3．2 化合物的分离纯化

2．4 二硫氰酸基双(N，N’-2，2’-联吡啶)钌的合成

2．4．1 二氯双(N，N’-2，2’-联吡啶)钌的合成

2．4．2 二硫氰酸基双(N，N’-2，2’-联吡啶)钌的合成

2．5 二硫氰酸基双(N，N’-2，2’-联吡啶-4，4’-二甲酸)钌的合成

2．5．1 N，N’-2，2’-联吡啶-4，4’-二甲酸(3)的合成

2．5．2 二氯双(N，N’-2，2’-联吡啶-4，4’-二甲酸)钌(4)的合成

2．5．3 二硫氰酸基双(N，N’-2，2’-联吡啶-4，4’-二甲酸)钉(5)的合成

2．6 结果与讨论

2．6．1 产物的表征

2．5 小结

第三章 利用染料N3竞争比色法检测Cys和GSH的研究

3．1 引言

3．2 主要实验试剂与仪器设备

3．3 实验部分

3．3．1 紫外检测

3．3．2 HPLC条件

3．3．3 N3-Hg探针溶液的制备

3．3．4 比色法检测Cys／GSH

3．3．5 选择性实验

3．3．6 血清溶液中Cys的检测

3．4 结果与讨论

3．4．1 N3-Hg2+复合物的制备及其性质

3．4．2 Cys及GSH的检测

3．4．3 选择性实验

3．4．4 人血清环境中检测半胱氨酸

3．5 小结

总结与展望

参考文献

攻读硕士期间研究成果

致谢