连续多次高压氧对新生大鼠缺氧缺血脑损伤脑皮质细胞线粒体膜电势的影响

摘要

目的:了解连续多次高压氧（HBO）干预对新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑皮质细胞线粒体膜电势（△ψm）的影响。
　　方法:7日龄SD大鼠150只，随机分为正常对照组、HIBD组、HIBD后高压氧治疗组（HIBD+HBO），后两组按Rice法制作新生大鼠HIBD模型（大脑左侧为损伤侧）。HIBD+HBO组动物在缺氧缺血(HI)后予以1～7天的HBO治疗，HIBD组及HIBD+HBO组动物按照处死时间点再分为1d，2d，3d，4d，5d，6d，7d亚组（各组n=10）。各组动物断头处死后，制备脑皮质细胞悬液，给予△ψm标记物罗丹明123(Rod123)孵育。用流式细胞仪检测Rho123的平均荧光强度(MFL)，并以该MFL为△ψm计量单位，分别记录各组左侧大脑皮质△ψm绝对值进行统计学分析。
　　结果:(1)正常对照组脑皮质细胞△ψm为（4.66±0.80）MFL;
　　(2) HIBD组各时间点脑皮质细胞△ψm均低于正常组，且差异均具有统计学意义(P＜0.05)，最低为1d时间点时（3.02±0.48）MFL，2d后△ψm较前稍有升高，但2～7d时间点之间△ψm无统计学意义;
　　(3) HIBD+HBO组各时间点△ψm亦均低于正常对照组，最低为1d时间点时（2.32±0.77）MFL，但各时间点△ψm呈现先明显降低再逐渐升高的变化规律，其中1～4d时间点的差异具有统计学意义(P＜0.05)，而5～7d时间点△ψm均接近正常组且差异无统计学意义(P＞0.05)，最高为6d时间点时（4.55±1.41）MFL。
　　(4) HIBD+HBO组与HIBD组相比较，1～3d时间点HIBD+HBO组△ψm低于HIBD组且差异具有统计学意义(P＜0.05)，4、5d时间点△ψm两组间无统计学意义，6～7d时间点HIBD+HBO组△ψm高于HIBD组且差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:HI对新生大鼠脑皮质细胞产生的线粒体功能障碍可持续较长时间;HBO干预在HIBD早期并不能改善线粒体功能，但重复多次HBO干预后脑皮质线粒体功能可得到改善;关于HBO治疗HIBD的时间窗的确定尚有待进一步研究。

目录

声明

摘要

符号说明

1 前言

2 材料和方法

2.1 总技术线路图

2.2 实验地点

2.3 建立新生SD大鼠HIBD模型

2.3.1 实验材料

2.3.2 实验方法

2.4 高压氧治疗

2.4.1 实验仪器

2.4.2 HBO治疗

2.5 脑细胞悬液制备

2.5.1 实验仪器

2.5.2 实验试剂

2.5.3 制备方法

2.6 流式细胞仪器测定线粒体膜电势

2.6.1 实验仪器

2.6.2 实验试剂

2.6.3 流式细胞仪操作实验方法

2.7 数据处理及统计学分析

3 结果

3.1 造模后SD大鼠的一般情况

3.2 流式细胞仪检验脑皮质细胞悬液ΔΨm值的可靠性分析

3.3 各组各时间点脑皮质细胞ΔΨm值

4 讨论

4.1 关于HIBD动物模型

4.2 HIE后线粒体膜电位的改变

4.3 高压氧与氧化应激损伤

4.4 高压氧与线粒体膜电位关系

4.5 高压氧治疗时间窗研究

4.6 关于高压氧治疗压力

4.7 本课题的局限性以及研究展望

4.7.1 本研究的局限性

4.7.2 研究展望

5 结论

参考文献

综述 线粒体膜电位在HIE发病机理中对细胞凋亡的作用

攻读学位期间主要成果

致谢