雌马酚对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用及其机制研究

摘要

目的：观察雌马酚对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用，并探讨其分子机制。
　　方法：用不同浓度雌马酚(10-7mol/L、5×10-7mol/L、10-6mol/L、5×10-6mol/L、10-5mol/L)和雌二醇(10-9mol/L)分别处理人乳腺癌细胞MCF-7和人正常乳腺细胞MCF-10A，并用显微镜观察细胞形态变化、MTT法测定细胞数量和增殖率、流式细胞仪测定细胞凋亡率和周期、体外划痕实验测定细胞迁移能力、蛋白质免疫印迹技术检测（bag-1、bcl-2、VEGF、ERK1/2、磷酸化ERK1/2、p38、磷酸化p38）蛋白的表达水平，从分子水平上了解雌马酚对MCF-7细胞增殖的抑制作用及其分子机制。
　　结果：雌二醇可以促进MCF-7细胞增殖，MCF-7细胞增殖率和细胞数量随着雌马酚浓度的升高和作用时间增加而下降。雌马酚对MCF-10A细胞无明显影响。与对照组相比，雌马酚组MCF-7细胞凋亡率明显增加，并将细胞周期阻滞于G0G1期。细胞迁移能力随雌马酚浓度升高而降低。雌二醇可以上调抗凋亡蛋白bag-1、bcl-2以及细胞生长因子VEGF蛋白表达量，随着浓度不断升高，雌马酚对bag-1、bcl-2、VEGF蛋白表达的抑制作用越发明显，当雌马酚浓度达到10-5mol/L时，bag-1、bcl-2、VEGF蛋白的表达量与对照组相比最低。雌二醇对总ERK1/2和总p38的表达无影响，可上调p-ERK1/2和p-p38蛋白表达量;雌马酚对总ERK1/2和总p38蛋白表达无影响;随着雌马酚浓度不断升高p-ERK1/2和p-p38蛋白表达降低。
　　结论：⑴雌马酚能够显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖，在10-7mol/L-10-5mol/L剂量范围内呈时间和剂量效应趋势。⑵雌马酚对MCF-7细胞的增殖抑制作用可能通过促进细胞凋亡，阻滞细胞周期于G0G1期，下调bag-1、bcl-2、VEGF蛋白以及p-ERK1/2和p-p38蛋白表达来实现。⑶研究提示，雌马酚可能具有防治雌激素受体阳性乳腺癌的作用。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

第二章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 实验仪器

2．1．2 主要试剂和器皿

2．2 方法

2．2．1 细胞培养与接种

2．2．2 台盼兰细胞计数

2．2．3 MTT法测定细胞生长增殖率

2．2．4 光学显微镜观察细胞形态学变化

2．2．5 流式细胞仪检测细胞凋亡和周期

2．2．6 体外划痕实验

2．2．7 蛋白质免疫印迹技术(Westem blowing)检测各蛋白表达

2．2．7 统计学分析

第三章 实验结果

3．1 MTT法测量雌马酚对MCF-7和MCF-10A细胞增殖作用的影响

3．1．1 雌马酚对MCF-7细胞增殖作用的影响

3．1．2 雌马酚对MCF-10A细胞增殖作用的影响

3．2 不同浓度雌马酚对MCF-7和MCF-10A细胞数量的影响

3．2．1 雌马酚对MCF-7细胞数量的影响

3．2．2 雌马酚对MCF-10A细胞数量的影响

3．3 不同浓度雌马酚对MCF-7和MCF-10A细胞形态学影响

3．3．1 雌马酚对MCF-7细胞形态学的影响

3．3．2 雌马酚对MCF-10A细胞形态学的影响

3．4 流式细胞仪检测雌马酚对MCF-7细胞凋亡和周期的影响

3．4．1 雌马酚对细胞凋亡的影响

3．4．2 雌马酚对细胞周期的影响

3．5 体外划痕实验

3．6 雌马酚对各蛋白表达的影响

3．6．1 Western blotting检测bag-1、bcl-2、VEGF蛋白水平的影响

3．6．2 雌马酚对ERK1／2蛋白水平的影响

3．6．3 雌马酚对P-38蛋白水平的影响

第四章 讨论

4．1 雌马酚对乳腺癌细胞增殖作用的影响

4．1．1 雌马酚降低MCF-7和MCF-10A细胞数量、抑制细胞增殖

4．1．2 雌马酚促进MCF-7细胞凋亡以及对细胞周期的影响

4．1．3 雌马酚降低细胞迁移能力

4．2 雌马酚抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的机制研究

4．2．1 雌马酚下调Bag-1、Bcl-2蛋白表达

4．2．2 雌马酚下调VEGF蛋白表达

4．2．3 雌马酚降低磷酸化ERK1／2和磷酸化p38蛋白活性

4．3 雌马酚与乳腺癌防治的前景

第五章 结论

参考文献

综述 雌马酚与健康效应的研究进展

攻读学位期间主要研究成果

致谢