人绒毛膜癌干细胞样细胞的分离、培养及相关特性的初步研究

摘要

[目的]用无血清悬浮培养法从人绒毛膜癌JEG-3细胞系中分离培养绒毛膜癌干细胞样细胞并对其特性进行鉴定。
　　[方法]
　　(1)将人绒毛膜癌细胞系JEG-3制成单细胞悬液，悬浮于特殊配制的无血清培养基(Serum-free medium，SFM)中获得JEG-3悬浮细胞球;
　　(2)流式细胞仪检测JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球表面标志物CD44、CD133及ABCG2的表达;
　　(3) Transwell小室迁移实验检测JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球的体外迁移能力;
　　(4)台盼蓝染色增殖实验比较JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球的增殖能力，并绘制生长曲线;
　　(5)将1000个细胞悬液置入SFM中培养，观察并计算其肿瘤球形成率;
　　(6)有限稀释法观察悬浮细胞球单个细胞成球能力;
　　(7)将JEG悬浮细胞球细胞置于含有血清的培养基中使其诱导分化，并观察其形态学的变化;
　　[结果]
　　(1)人绒毛膜癌JEG-3可在SFM中存活、增殖，形成悬浮生长的细胞球，并可连续传代;
　　(2)流式细胞仪检测干细胞表面标记物，JEG-3悬浮细胞球表面标志物CD44、CD133及ABCG2的表达均明显高于JEG-3亲本细胞（P＜0.05）;
　　(3) Transwell小室检测JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球的迁移能力，JEG-3悬浮细胞球较JEG-3亲本细胞具有更强的体外迁移能力（F值=8.140，P值0.008，P值＜0.05）;
　　(4)台盼蓝染色的增殖实验，JEG-3悬浮细胞球与JEG-3亲本细胞相比，JEG-3悬浮细胞球具有更强的增殖能力(F值=2775.601，P值＜0.001);
　　(5) JEG-3亲本细胞、第一代JEG-3悬浮细胞球和第三代JEG-3悬浮细胞球的肿瘤球形成率分别为（7.57±0.80）％、（7.23±0.33）％（7.52±0.62）％，三者比较(P＞0.05)，即JEG-3亲本细胞与不同代的JEG-3悬浮细胞球的成球率无明显差异;
　　(6)有限稀释法在96孔板中得到单个悬浮细胞球细胞，在显微镜下观察到了单个细胞增殖成悬浮细胞球过程;
　　(7)将无血清培养基中的JEG-3悬浮细胞球细胞接种于含血清培养基中可重新贴壁分化，分化后细胞与JEG-3亲本细胞形态无明显差异。
　　[结论]
　　(1)绒癌JEG-3细胞系在无血清培养基中可获得绒毛膜癌干细胞样细胞;
　　(2)获得的JEG-3干细胞样细胞高表达肿瘤干细胞表面标记物ABCG2、CD133、CD44;
　　(3)获得的JEG-3肿瘤干细胞具有高迁移力、高增殖力、自我更新能力、多向分化能力等肿瘤干细胞特性。

目录

声明

摘要

缩略语表

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 细胞系

2．2 仪器设备

2．3 实验试剂

2．4 实验试剂的配制

2．5 方法

2．6 统计学方法

第三章 结果

3．1 绒癌JEG-3悬浮细胞球的培养及传代

3．2 CD44、CD133、ABCG2在绒癌JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球中的表达差异

3．3 绒癌JEG-3亲本细胞与JEG-3悬浮细胞球迁移能力的差异

3．4 绒毛膜癌JEG-3细胞系与JEG-3悬浮细胞球增殖能力的差异

3．5 有限稀释法检测绒癌JEG-3悬浮细胞球单细胞克隆能力

3．6 绒癌JEG-3亲本细胞与其悬浮细胞球的成球率差异

3．7 JEG-3悬浮细胞球诱导分化

第四章 讨论

4．1 肿瘤干细胞的分离和鉴定

4．2 肿瘤干细胞与千细胞表面标记

4．3 肿瘤干细胞与肿瘤转移

4．4 肿瘤干细胞的自我更新、多向分化、无限增殖能力

第五章 结论

参考文献

综述 肿瘤干细胞在妇科肿瘤的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢