EGCG活化caspase依赖的线粒体途径诱导人胃癌细胞凋亡

摘要

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过活化caspase依赖的线粒体途径诱导人胃癌BGC823细胞凋亡的作用机制。 方法：MTT法检测EGCG对BGC823细胞生长的影响；罗丹明123（Rh123）和碘化丙啶（PI）双染，流式细胞术（FCM）分析测定细胞线粒体膜电位（Δψm）和凋亡率；caspase-9分光光度法检测试剂盒检测经EGCG处理后BGC823细胞中caspase-9活性；免疫细胞化学法和Western blot检测EGCG处理后BGC823细胞中线粒体凋亡信号传导通路相关蛋白，如Bax、Bcl-2、caspase-9、Cyt c、caspase-3等的表达。 结果：EGCG.对BGC823细胞生长有显著抑制作用，呈时间和剂量依赖性。Rh123/PI双染FCM检测结果显示， EGCG（20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml）作用24h后，BGC823细胞中Δψm降低，细胞凋亡率增加，EGCG合用caspase-9特异性抑制剂（Ac-LEHD-CHO）组BGC823细胞中Δψm及细胞凋亡率与对照组比较差异无显著性，EGCG 40 μg/ml 作用12h、24h、48h后，BGC823细胞中Δψm降低，细胞凋亡率增加，说明EGCG以剂量和时间依赖方式诱导BGC823细胞凋亡，Ac-LEHD-CHO能阻断EGCG诱导的凋亡。Caspase-9分光光度法检测试剂盒检测到，EGCG能以剂量和时间依赖方式增加caspase-9活性，Ac-LEHD-CHO能抑制EGCG增加caspase-9活性。免疫细胞化学法和Western blot检测结果显示，EGCG能促进细胞色素c（Cyt c ) 释放，Bax、caspase-9和caspase-3蛋白表达增加，Bcl-2蛋白表达下调，呈剂量依赖性，Ac-LEHD-CHO可以阻断上述作用；EGCG 40 μg/ml作用12h、24h、48h后，BGC823细胞中Cyt c 释放增加，Bax、caspase-9和caspase-3蛋白表达增加，Bcl-2蛋白表达下调，呈时间依赖性。 结论：EGCG能抑制BGC823细胞增殖，并通过活化caspase依赖的线粒体信号传导途径诱导其凋亡。