利用酵母双杂交系统研究大麦黄矮病毒（BYDV）和小麦间的互作

摘要

酵母双杂交系统(Yeast Two-hybrid System)是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法.该系统能迅速、敏感地在真核细胞体内检测蛋白生理状态下的互作,并可快速获得目的蛋白的编码基因,具有操作简便、灵敏度高的特点,已在植物病毒学的很多领域得到应用.该研究利用该系统对大麦黄矮病毒(Barley Yellow Dwarf Virus BYDV)和寄主小麦之间的相互作用进行研究,为该病毒运动模式研究进行初步探索.根据已知的大麦黄矮病毒GPV株系的外壳蛋白(Coat Protein CP)和移动蛋白(Movement Protein MP)基因序列合成了CP,MP基因的上下游引物,通过PCR扩增获得目的片段,经过Sal Ⅰ和Pst Ⅰ双酶切、连接、转化、重组质粒的酶切鉴定及基因测序,构建了酵母表达载体p GBKT7-GPV-CP和p GBKT7-GPV-MP,用于在酵母双杂交分析中表达诱饵融合蛋白.

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第一章前言

1.酵母双杂交系统

1.1酵母双杂交系统的基本原理

1.2特点与优点

1.3酵母双杂交系统局限性和改进

1.4酵母双杂交系统的发展

2.酵母双杂交系统在植物病毒学上的应用

2.1酵母双杂交系统在病毒粒体分子结构和装配研究中的应用

2.2酵母双杂交系统在病毒核酸复制以及基因表达调控研究中的应用

2.3酵母双杂交系统在病毒介体传播的分子机制研究中的应用

2.4酵母双杂交系统在病毒运动模式中的应用

2.5酵母双杂交系统在病毒致病机制研究中的应用

2.6酵母双杂交系统在病毒编码蛋白联系图谱研究中的应用

第二章BYDV-GPV-CP，MP酵母表达载体的构建

1.材料

2.方法

2.1 BYDV-GPV-CP，MP基因的克隆

2.2序列测定及分析

3.结果与分析

3.1 BYDV-GPV-CP，MP基因的PCR扩增

3.2 BYDV-GPV-CP，MP基因的克隆和重组质粒的鉴定

3.3序列测定及分析

4.小结与讨论

第三章酵母双杂交筛选

1.材料

2.方法

2.1酵母菌株表现型的确认

2.2酵母共转化筛选

2.3酵母匹配筛选

2.4半乳糖苷酶发色检测

2.5提取质粒DNA、电转化

2.6小麦cDNA文库检测

3.结果与分析

3.1酵母菌株表现型的确认

3.2酵母共转化筛选

3.3酵母匹配筛选

3.4小麦cDNA文库检测

4.小结与讨论

第四章结论

第五章附录

参考文献

致谢