原花青素对氨基脲染毒雄性小鼠生殖毒性的影响

摘要

目的:
　　1.观察给予原花青素(proanthocyanidins,PC)前后对氨基脲(semicarbazide, SEM)致雄性小鼠生殖毒性损伤的保护效果;
　　2.探讨原花青素对氨基脲致雄性小鼠生殖毒性损伤保护作用的可能机制,为其防治氨基脲所致男性生殖损伤提供科学实验依据。
　　方法:
　　80只清洁级雄性昆明种(KM)小鼠按体重随机分为8组,每组10只:溶剂对照组、SEM染毒组、SEM染毒+低剂量PC保护组、SEM染毒+中剂量PC保护组、SEM染毒+高剂量PC保护组、低剂量PC保护+SEM染毒组、中剂量PC保护+SEM染毒组、高剂量PC保护+SEM染毒组。溶剂对照组用去离子水灌胃;SEM染毒组按56.25 mg/kg.bwSEM溶液灌胃染毒2周,再继续用去离子水灌胃4周;SEM染毒+3个剂量PC保护组,先给3组动物分别按56.25 mg/kg.bwSEM溶液灌胃染毒2周后,再分别按设计PC的保护剂量(100、200、400mg/kg.bw)继续灌胃4周;3个剂量PC保护+SEM染毒组,先分别给3组动物按设计PC的保护剂量(100、200、400mg/kg.bw)灌胃4周,再继续分别按56.25 mg/kg.bwSEM溶液灌胃染毒2周。以上各组动物均按10ml/kg.bw体积灌胃,连续灌胃6周,每日1次。
　　末次灌胃24h后,摘取眼球采血,制备血清采用酶联免疫分析法(ELISA)检测T、LH、FSH含量;颈椎脱臼处死小鼠,分离双侧睾丸、附睾,称重并计算脏器系数;取新鲜附睾尾制成精子悬液,置光学显微镜下观察精子活动度、数量及形态学的改变;取睾丸实质部分制备组织匀浆液,按试剂盒说明操作分别测定LDH-X、GSH-Px、ACP、GGT、SOD酶的活性和GSH、MDA的含量;常规病理学切片,HE染色观察睾丸组织形态学变化。
　　结果:
　　1.SEM染毒组小鼠体重增长低于溶剂对照组(P<0.05);中、高剂量PC先保护组小鼠体重增长分别高于PC后保护组,差别有统计学意义(P<0.05)。
　　2.SEM染毒组小鼠睾丸和附睾脏器系数低于溶剂对照组(P<0.05);高剂量PC后保护组小鼠睾丸和附睾脏器系数高于SEM染毒组(P<0.05);低、中、高剂量PC先保护组小鼠睾丸脏器系数和中、高剂量PC先保护组附睾脏器系数分别高于PC后保护组,差别均有统计学意义(P<0.05)。
　　3.睾丸病理组织学观察显示:溶剂对照组睾丸曲细精管上皮细胞层次正常,管腔中无脱落细胞,管腔中见到大量成熟精子等;SEM染毒组睾丸曲细精管上皮细胞层次显著减少,部分管壁甚至脱落缺失,腔内未见精子等;PC后保护组睾丸的形态较SEM染毒组有所改善,且随PC剂量的增加改善较明显,睾丸间质有所缩小,曲细精管上皮细胞层次趋向正常,腔内精子较多;PC先保护组睾丸的曲细精管上皮细胞层次和腔内的精子数量改善较PC后保护组效果更明显。
　　4.与溶剂对照组比较,SEM染毒组小鼠精子数、活动度降低,畸形率增加(P<0.05);与SEM染毒组比,高剂量PC后保护组小鼠精子数增加,中、高剂量 PC后保护组小鼠精子活动度增强,畸形率降低(P<0.05);低、中、高剂量PC先保护组小鼠精子数、精子活动度增加,畸形率降低,与相同剂量PC后保护组比,差别均有统计学意义(P<0.05)。
　　5.与溶剂对照组比较,SEM染毒组小鼠睾丸组织LDH-X降低、ACP含量升高(P<0.05);与SEM染毒组相比,低、中、高剂量PC后保护组LDH-X含量升高、高剂量PC后保护组ACP降低(P<0.05);低、中、高剂量PC先保护组LDH-X分别高于相同剂量PC后保护组,高剂量PC先保护组ACP含量低于同剂量PC后保护组,差别均有统计学意义(P<0.05)。
　　6. SEM染毒组小鼠血清T、LH、FSH含量均分别低于溶剂对照组(P<0.05);高剂量PC后保护组小鼠血清T、FSH含量高于SEM染毒组(P<0.05);低、中、高PC先保护组小鼠血清T含量分别高于PC后保护组(P<0.05);中、高剂量PC先保护组小鼠血清 LH、FSH含量分别高于 PC后保护组,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　7. SEM染毒组小鼠 GGT含量和支持细胞波形蛋白表达阳性细胞数均低于溶剂对照组(P<0.05);高剂量PC后保护组小鼠GGT、阳性细胞数明显高于SEM染毒组(P<0.05);中、高剂量PC先保护组小鼠GGT、阳性细胞数分别高于PC后保护组,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　8.与溶剂对照组比较,SEM染毒组睾丸中SOD、GSH-PX活力及GSH含量明显下降,MDA含量升高,(P<0.05);与SEM染毒组比较,高剂量PC后保护组SOD活力上升、MDA含量下降(P<0.05),而GSH-PX活力、GSH含量变化不明显(P>0.05);低、中、高剂量PC先保护组小鼠睾丸组织SOD活力升高,中、高剂量MDA含量降低,分别与PC后保护组比(P<0.05);而高剂量PC先保护组GSH-PX活力和GSH含量分别高于PC后保护组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　结论:
　　1.亚慢性中剂量(56.25 mg/kg·bw)SEM可致雄性小鼠生殖系统损伤;
　　2.采用200-400mg/kg·bw剂量PC可保护SEM对雄性小鼠亚慢性生殖系统的损伤,且在SEM致生殖系统损伤前用PC干预效果更明显;
　　3.抗氧化作用是PC保护SEM所致生殖损伤的重要机制之一。

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主要英文缩略语索引

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英文摘要

1 前 言

2 材料和方法

2.1材料

2.2 实验方法

3 结 果

3.1 PC对SEM染毒雄性小鼠生长情况的影响

3.2 PC对SEM染毒小鼠睾丸和附睾脏器系数的影响

3.3 PC对SEM染毒小鼠睾丸组织形态学影响

3.4 PC对SEM染毒小鼠精子质量的影响

3.5 PC对SEM染毒小鼠睾丸LDH-X、ACP含量的影响

3.6 PC对SEM染毒小鼠血清T、LH、FSH水平的影响

3.7 PC对SEM染毒小鼠睾丸酶及支持细胞波形蛋白表达的影响

3.8 PC对SEM染毒小鼠睾丸中SOD、MDA 、GSH-PX、GSH的影响

4 讨 论

4.1 氨基脲对生殖系统产生毒作用

4.2 原花青素可改善氨基脲致脏器系数的损害作用

4.3 原花青素对氨基脲致生精功能的恢复作用

4.4 原花青素对氨基脲致雄性小鼠性激素水平的调节作用

4.5 原花青素对氨基脲致小鼠睾丸酶活力和支持细胞的作用

4.6 原花青素拮抗氨基脲致睾丸组织的氧化损伤作用

4.7 问题和研究展望

综述

参考文献

研究生学习期间发表的论文

致谢