莱菔硫烷对前列腺癌PC-3细胞中COX-2表达及p38信号通路影响的研究

摘要

目的:
　　探讨莱菔硫烷(SFN)对前列腺癌细胞系PC-3环氧化酶(COX)-2蛋白表达的影响,以及其能否通过p38信号途径发挥对COX-2的作用,从而为SFN的临床应用价值提供参考。
　　方法:
　　用不同浓度的SFN进行体外对前列腺癌细胞系PC-3孵育24h后,RT-PCR和Western blot分别检测细胞COX-2 mRNA和蛋白的表达。提取刺激后的细胞总蛋白,Western blot检测细胞 p38的磷酸化情况。最后用p38特异性抑制剂SB202190以及p38激活剂茴香霉素与SFN处理过的PC-3细胞共同孵育,观察细胞COX-2蛋白的表达情况。
　　结果:
　　RT-PCR结果显示,PC-3细胞在静息状况下COX-2呈一定丰度表达,0~20μmol/L SNF处理后,COX-2 mRNA随SNF浓度的递增而表达量逐渐降低。Western blot进一步证实COX-2蛋白水平也随之降低。20μmol/L SFN于0~24h处理PC-3细胞后,COX-2蛋白水平随孵育时间的延长而逐渐降低。不同浓度的SFN处理24h后,能显著诱导PC-3细胞p38磷酸化,经SB202190处理后COX-2表达明显增高,而 p38激活剂茴香霉素处理后能进一步降低细胞内COX-2蛋白的水平。
　　结论:
　　1.SFN可能在基因和蛋白水平抑制前列腺癌细胞系PC-3表达COX-2;
　　2.SFN可能能诱导PC-3细胞中p38磷酸化;
　　3.SFN降低细胞COX-2表达可能与p38磷酸化有关。

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前言

1 主要仪器

2．细胞系

3．主要实验试剂

3.1 试剂盒

3.2 酶类、分子量标准

3.3 抗体

3.4 抗生素

3.5 培养基及溶液

3.5 其它

4 Western blot检测

4.1 细胞总蛋白提取

4.2 BCA测定蛋白浓度

4.3 SDS-PAGE

4.4 转膜

4.5 封闭

4.6 孵育抗体

4.7 显影

5 统计学方法

结论

参考文献

综述

参考文献

研究成果

致谢