Th17细胞及其相关细胞因子在幽门螺杆菌感染中的作用研究

摘要

目的:通过建立幽门螺杆菌(H. pylori)感染的C57BL/6小鼠模型,分析感染后不同时期小鼠胃组织IL-17、IL-23 mRNA及蛋白表达情况,以及脾脏单细胞悬液中Th17细胞应答情况,并分析感染后胃炎的严重程度与Th17-IL-17应答效应的相关性,同时设立治疗组检测上述指标的变化情况。为探讨 IL-23/IL-17信号通路在H. pylori感染中的作用奠定基础,为H. pylori诱发的胃炎的免疫防御及治疗提供新的理论和实验依据。
　　方法:
　　(1)对6~8周龄的C57BL/6小鼠进行灌胃感染H. pylori,每隔48小时一次,共灌胃5次。在H. pylori感染后的4、8、12周分别处死小鼠,鉴定H. pylori感染小鼠模型是否成功。同时设立治疗组,采用三联疗法对灌胃感染4周后的小鼠进行治疗;
　　(2)对对照组、感染组、治疗组小鼠分别取部分胃组织作H﹠E染色,显微镜下观察胃组织炎症变化;
　　(3)采用Trizol法对胃组织及脾细胞提取RNA,RT-PCR检测细胞因子IL-17、IL-23 mRNA的表达情况;
　　(4) ELISA检测胃组织匀浆上清中细胞因子IL-17、IL-23蛋白含量;
　　(5)采用PMA+Ionomycin或H. pylori WCP对脾淋巴细胞进行刺激培养,流式细胞术检测脾脏单细胞悬液中Th17细胞应答情况。
　　结果:
　　(1)成功建立了H. pylori感染小鼠模型,感染组小鼠胃黏膜炎症程度随感染时间的延长而不断加重;
　　(2)与对照组相比,H. pylori感染组小鼠的胃组织中IL-17、IL-23的表达在mRNA及蛋白水平均显著增高,H. pylori感染组小鼠的脾淋巴细胞中Th17细胞比例显著高于对照组小鼠的该比值;
　　(3) H. pylori感染组小鼠IL-17、IL-23 mRNA及蛋白含量以及脾淋巴细胞中Th17细胞比例随感染时间延长而增加;
　　(4)治疗组小鼠IL-17、IL-23表达量及脾淋巴细胞中Th17细胞比率,与治疗前即感染后4周的小鼠相比较均有所下降;
　　(5)感染后不同时期小鼠胃黏膜的炎症程度与IL-17、IL-23的表达量存在正相关。
　　结论:
　　(1) H. pylori感染后IL-17、IL-23表达均上调;
　　(2) H. pylori感染后可以诱导Th17细胞应答;
　　(3) H. pylori感染后胃炎程度与胃组织IL-17、IL-23含量存在正相关。

目录

封面

声明

目录

主要英文缩略语索引

中文摘要

英文摘要

1 前言

2.实验材料

2.1主要实验仪器

2.2 主要实验试剂

3 实验方法及步骤

3.1幽门螺杆菌（H. pylori）感染小鼠模型的建立

3.2 小鼠H. pylori感染的鉴定

3.3胃黏膜组织学检查

3.4 反转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测胃组织及脾细胞IL-17 mRNA、IL-23 mRNA的表达

3.5 ELISA检测胃组织匀浆上清中IL-17、IL-23含量

3.6流式细胞术检测Th17细胞

3.7 统计学处理

4.实验结果

4.1 小鼠感染H. pylori的鉴定

4.2 小鼠胃黏膜组织学改变

4.3 IL-17 mRNA、IL-23mRNA在胃组织及脾脏中的表达

4.4 胃组织匀浆上清中IL-17、IL-23的检测

4.5 FCM检测H. pylori感染后Th17细胞应答

4.6 Th17、IL-17、IL-23含量与胃黏膜病理损伤程度的相关性分析

5.讨论

6 结论

参考文献

综述

发表及待发表论文

致谢