DHA通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌MGC-803细胞生长增殖

摘要

目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对胃癌MGC803细胞生长增殖的作用及作用机制，为开发新的抗肿瘤药物提供实验依据。
　　方法：
　　1．体外培养胃癌MGC803细胞,分别采用1、10、30、60、100uMol/L浓度的DHA作用胃癌细胞MGC-80324h后，MTT法观察细胞生长增殖抑制情况。
　　2．制备细胞爬片，免疫细胞化学染色，经60uMol/L浓度的DHA处理MGC-803细胞24h后，观察细胞β-catenin表达及分布情况;
　　3．60uMol/L浓度的DHA分别作用MGC-803细胞0.5h、1h、3h、6h, Western Blotting技术检测细胞GSK-3β、β-catenin、P-GSK-3β蛋白表达情况，另外选用GSK-3β活性抑制剂Licl处理后，用60uMol/L浓度的DHA处理MGC-803细胞24h，观察细胞中β-catenin蛋白的表达。
　　结果：
　　1.MTT法测定结果显示:DHA浓度由1uMol/L增加到100uMol/L MGC-803细胞的生长抑制率由8％提升到64.25%，呈浓度-效应依赖关系，并计算出 DHA抑制MGC-803细胞增殖的IC50值在60uMol/L。各浓度组与对照组之间差异具有统计学意义, P<0.05。
　　2.免疫细胞化学检测结果显示:经 DHA处理 MGC-803胃癌细胞后,β-catenin蛋白主要分布于胞膜和胞质，β-catenin蛋白总量减少了22.43±0.66%，P<0.05，各组间差异具有统计学意义。
　　3.Western Blotting结果显示:60uMol/L DHA分1/2,1,3,6h时间段处理MGC-803细胞后，β-catenin蛋白总量逐渐减少; GSK-3β蛋白总量逐渐增多，P-GSK-3β蛋白总量逐渐减少。经 Licl处理后DHA作用24h组MGC-803细胞β-catenin蛋白总量较对照组减少32.19±2.32%，单用DHA处理24h组β-Catenin表达较对照组减少了42.54±3.21%，经Licl处理组β-catenin蛋白总量较单用DHA组高出10.33±2.21%，P<0.05，各组间差异具有统计学意义。
　　结论：
　　1.DHA可有效抑制 MGC-803细胞生长增殖。
　　2.DHA通过降低 GSK3-β(p-Ser9）磷酸化水平，增加GSK-3β活性，促进β-catenin的降解，抑制 MGC-803细胞的生长增殖。

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中英文缩略词表

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前言

一 材料

1．细胞株：

2. 仪器

3．主要试剂

4. 试剂的配制

二、方法

1. MTT

2. 细胞免疫化学

3 .Western blot实验

4 统计学处理

结果

1.不同浓度DHA对人胃癌 MGC-803细胞生长增殖的影响

2.免疫细胞化学检测经DHA作用后MGC-803细胞β-Catenin表达及分布情况

3. Western blot检测经DHA作用后MGC-803细胞β-Catenin表达情况

4. Western blot检测经DHA作用后MGC-803细胞GSK-3β， GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白的表达情况

5 GSK-3β活性抑制剂Licl预处理后MGC-803细胞β-Catenin表达情况

讨论

结论

参考文献

综述： Wnt信号通路与肿瘤干细胞

致谢