HSP27磷酸化对CSE诱导肺氧化应激的保护作用及与γ-GCS表达的相关研究

摘要

目的：检测被动吸烟大鼠肺组织中HSP27表达水平及磷酸化水平。研究香烟烟雾提取物（CSE）处理的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）中HSP27表达水平及磷酸化水平，以及与γ-GCS表达的相关性。
　　方法：本研究分为动物实验和细胞实验两部分。（1）动物实验部分：40只雄性Wistar大鼠随机分为四组，分别为对照组、吸烟2个月组、吸烟4个月组和戒烟组（吸烟4个月然后戒烟1个月），复制被动吸烟大鼠模型，收集对照组和实验组大鼠肺组织标本，Western-blot法检测各组肺组织中的HSP27表达水平及磷酸化状态。（2）细胞实验部分：酶消化法分离Wistar大鼠AECⅡ并传代培养，取第3代对数生长期细胞用于实验。用0％、2.5%、5%、10%的CSE分别处理大鼠AECⅡ6h、12h，采用Western-blot检测各组细胞中的HSP27、p-HSP27和γ-GCS的蛋白表达水平，RT-PCR法检测γ-GCSmRNA的表达水平。再用5%CSE分别对细胞处理0h、6h、12h、24h、48h，采用Western-blot法检测各组细胞中的HSP27、p-HSP27和γ-GCS的蛋白表达水平，RT-PCR法检测γ-GCSmRNA的表达水平。
　　结果：⑴动物实验部分：对照组、吸烟2个月组、吸烟4个月组、戒烟组大鼠肺组织HSP27表达水平分别为0.73±0.01、0.77±0.01、0.78±0.03和0.77±0.01，4组之间无显著性差异（p>0.05）。吸烟2个月组大鼠肺组织p-HSP27水平显著高于对照组（0.37±0.02 VS0.14±0.01，p<0.05），吸烟4个月组较吸烟2个月组进一步升高（0.48±0.02 VS0.37±0.02，p<0.05），戒烟组（0.41±0.01）较吸烟4个月组降低（p>0.05），但仍然高于吸烟2个月组（p<0.05）。各组大鼠肺组织HSP27磷酸化比例变化趋势与p-HSP27水平变化趋势一致。⑵细胞实验部分：大鼠AECⅡ分别经0%(对照组)、2.5%、5%和10%的CSE处理6h及12h后，总HSP27及p-HSP27蛋白质水平随CSE浓度升高而升高，各浓度12h处理组的HSP27及p-HSP27蛋白质水平均高于6h处理组。大鼠AECⅡ经5%CSE分别处理0h（对照组）、6h、12h、24h、48h，HSP27水平分别为0.12±0.01、0.16±0.02、0.23±0.03、0.29±0.01、0.36±0.01，p-HSP27水平分别为0.02±0.00、0.06±0.01、0.13±0.02、0.23±0.03、0.23±0.03，HSP磷酸化比例分别为0.17±0.04、0.39±0.07、0.57±0.09、0.80±0.06、0.64±0.09（其中6h组和12h显著高于对照组，24h组高于6h组和12h，48h组低于24h但高于6h组和12h，p<0.05）。AECII经0、2.5%、5%、10%的CSE处理24h，γ-GCS mRNA表达水平分别为0.21、0.32、0.44、0.54；经5%的CSE处理0 h、6 h、12 h、24 h、48h，γ-GCS mRNA的表达水平分别为0.27、0.43、0.50、0.72和0.61。AECⅡ经5%的CSE处理0 h、6 h、12 h、24、48h，γ-GCS蛋白表达水平随处理时间进行性升高，于24小时达到高峰。直线相关分析表明AECⅡγ-GCS mRNA和蛋白表达水平与HSP27、p-HSP27表达水平以及HSP27磷酸化比例成正相关。
　　结论：①HSP27磷酸化参与了被动吸烟大鼠肺内抗氧化应激机制。②HSP27对CSE处理的大鼠AECⅡ可能具有抗氧化保护作用。③HSP27磷酸化可能通过上调γ-GCS的表达水平对CSE诱导的大鼠AECⅡ氧化应激产生保护作用。

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主要缩略语简表

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

一. 主要试剂及来源

二.常用溶液配方

三.试验方法

结果

1. 大鼠肺组织中HSP27及p-HSP27的蛋白表达情况

2.大鼠AECⅡ 中γ-GCS-HS mRNA表达情况

3.大鼠AECⅡ 中HSP27、p-HSP27、γ-GCS-HS蛋白的表达变化

4. 大鼠AECⅡ 中HSP27、p-HSP27及磷酸化比列与γ-GCS-HS mRNA和蛋白表达的相关性分析

讨论

结论

参考文献

附图

综述：HSP27在慢性阻塞性肺疾病中的作用进展进展

硕士期间发表和撰写的论文

致谢