卵巢癌A2780细胞特异性结合肽的筛选及鉴定

摘要

目的:利用噬菌体体内展示技术，筛选与人卵巢癌A2780细胞特异性亲和的短肽，以及研究短肽对卵巢癌细胞的抑制作用。有望为卵巢癌靶向药物的研究开辟新的道路。
　　方法:构建裸鼠卵巢癌模型，尾静脉注射噬菌体文库于裸鼠体内，经过3轮体内淘选，得到高亲和力噬菌体，并测定、比较在肿瘤、心脏、肝脏和脑组织中的噬菌体效价。利用免疫组化方法，对各组织噬菌体的结合情况进行鉴定。同时随机挑取10个第3轮淘选后的噬菌体单克隆，ELISA试验对目标噬菌体进行亲和力检测。提取高亲和力噬菌体DNA，测定出短肽序列，并进行生物信息学分析。合成此短肽，用MTT法检测其对卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用。
　　结果:裸鼠卵巢癌模型构建成功，3轮体内筛选后比较回收的噬菌体效价，肿瘤组织结合噬菌体为肝脏组织3.4×103倍，脑组织1.4×106倍，心脏组织1.3×106倍。免疫组化结果显示:肿瘤组织为阳性，肝脏为弱阳性，心脏及脑组织为阴性，说明结合的噬菌体在肿瘤组织富集。实验10个单克隆P/N>2.1，其中8个大于3.0，说明此10个阳性克隆均具有ELISA亲和力，8个具有高亲和力，测得此条与噬菌体特异性结合的短肽为PHLATLF。合成短肽，MTT法结果显示：特异性结合短肽对卵巢癌A2780细胞具有生长抑制作用，且与药物浓度及作用时间相关。
　　结论:利用噬菌体体内展示技术和免疫组化、ELISA方法，成功筛选与鉴定出与人卵巢癌A2780细胞特异性亲和的短肽PHLATLF，为进一步将其与化疗药物偶联，研制出新的抗卵巢癌靶向药物打下基础。

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前言

技术路线

材料和方法

1．实验材料和主要试剂：

2实验方法

实验结果

1卵巢癌A2780细胞裸鼠肿瘤模型的建立及大体观察

2 噬菌体效价测定及富集效果分析

3免疫组化噬菌体富集效果分析

4 ELISA鉴定卵巢癌A2780细胞与噬菌体单克隆的亲和力

5 短肽序列结果及分析

6 短肽PHLATLF对卵巢癌A2780细胞生长抑制作用

讨论

6.结论

参考文献

综述

攻读硕士学位期间完成、发表论文情况

致谢