卵巢癌特异性结合肽对卵巢癌A2780细胞IKK/NF-κB通路中蛋白表达的影响

摘要

目的：本课题前期通过体、内外实验初次成功筛选并合成了卵巢癌特异性结合肽（Ovariancancer specific targeting peptide, OSTP），并通过体外实验证实OSTP具有促卵巢癌细胞A2780细胞凋亡及增敏紫杉醇促卵巢癌A2780细胞凋亡的作用，本实验进一步研究OSTP通过IKK/NF-κB通路促卵巢癌细胞及增敏紫杉醇促卵巢癌细胞凋亡。将为OSTP用于临床抗卵巢癌治疗奠定实验基础。
　　方法：1.合成OSTP。
　　2.体外培养卵巢癌 A2780细胞株，将生长状态处于对数期的卵巢癌A2780细胞株，随机分成1640空白对照组、OSTP15min组、OSTP30min组、OSTP1h组、OSTP3h组、OSTP6h组及OSTP12h组，分别于15min、30min、1h、3h、6h及12h后提取细胞蛋白，通过Western Blot实验，检查各组IKKβ、磷酸化IKKβ、NF-κB（p65）及磷酸化NF-κB（p65）的表达。
　　3.体外培养卵巢癌 A2780细胞株，将生长状态处于对数期的卵巢癌A2780细胞株，随机分成1640空白对照组、DMSO对照组、紫杉醇组、OSTP组、OSTP联合紫杉醇组，24小时后分别提取各组细胞蛋白，通过Western Blot实验，检查各组IKKβ、磷酸化IKKβ、NF-κB（p65）及磷酸化NF-κB（p65）的表达。
　　结果：1.成功合成 OSTP。
　　2.与对照组相比，OSTP15min组、30min组、1h组、3h组、6h组、12h组中的IKKβ蛋白表达水平无显着差异（p>0.05）。与对照组相比OSTP15min组、30min组、12h组中的IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表达水平降低（p<0.01）；而OSTP1h组、3h组、6h组中IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表达水平升高（p<0.01），且OSTP15min组IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表达水平最低，OSTP3h组IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表达水平最高。
　　3.与对照组相比，OSTP1h组、3h组、6h组、12h组中的 NF-κB（p65）蛋白表达水平降低（p<0.01）；自OSTP处理1h起，随时间延长，NF-κB（p65）蛋白表达水平逐渐减低（p<0.01）。与对照组相比 OSTP15min组、30min组、1h组、3h组、6h组、12h组中的NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表达水平降低（p<0.01）；且OSTP30min组NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表达水平最低（p<0.01）。
　　4.与对照组相比，紫杉醇组中的 IKKβ蛋白表达水平降低（p<0.01）；与对照组相比，OSTP组中的IKKβ蛋白表达水平无显着性差异（p>0.05）；与紫杉醇组相比，联合用药组中的 IKKβ蛋白表达水平无统计学差异（p>0.05）。与对照组相比 OSTP组、紫杉醇组中的IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表达水平降低（p<0.01）；与OSTP组、紫杉醇组相比，联合用药组中的IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白表达水平降低（p<0.01）；差异均具有统计学意义。
　　5.与对照组相比，OSTP组、紫杉醇组中的NF-κB（p65）蛋白表达水平降低（p<0.01）。与 OSTP组、紫杉醇组相比，联合用药组中的 NF-κB（p65）蛋白表达水平降低（p<0.01）；均具有统计学差异。与对照组相比OSTP组、紫杉醇组中的NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表达水平降低（p<0.01）；与 OSTP组、紫杉醇组相比，联合用药组中的NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表达水平降低（p<0.01）；均具有统计学差异。
　　结论：1. OSTP促卵巢癌A2780细胞凋亡的作用，其机制可能与IKK/NF-κB信号通路中的关键蛋白IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白、NF-κB（p65）及NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表达降低有关。
　　2. OSTP增敏紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡作用，其机制可能与 IKK/NF-κB信号通路中的关键蛋白 IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白、NF-κB（p65）及NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白表达降低有关。

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前言

材料和方法

1．实验材料和主要试剂：

1.1实验细胞株

1.2 OSTP肽合成

1.3 主要试剂

1.4试剂配制:

1.5主要仪器

2．实验方法

2.1 OSTP合成

2.2 细胞培养

2.3Western Blot检查OSTP诱导卵巢癌A2780细胞凋亡不同时间点IKK/NF-κB信号通路中IKKβ、磷酸化IKKβ（Tyr188）、NF-κB（p65 Ser311）及磷酸化NF-κB(p65)蛋白的表达情况

2.4Western Blot检查不同处理组卵巢癌A2780细胞中IKK/NF-κB信号通路中的IKKβ、磷酸化IKKβ（Tyr188）、NF-κB（p65 Ser311）及磷酸化NF-κB(p65)蛋白表达情况

2.5 统计学方法

实验结果

1.合成 OSTP

2.OSTP 促卵巢癌 A2780 细胞凋亡，不同时间点 IKKβ蛋白及 IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白的表达情况。

3.OSTP促卵巢癌A2780细胞凋亡，不同时间点NF-κB（p65）蛋白及NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白的表达情况。

4.OSTP 联合紫杉醇诱导卵巢癌 A2780 细胞凋亡中的 IKKβ蛋白及IKKβ（Tyr188）磷酸化蛋白的表达情况。

5.OSTP 联合紫杉醇诱导卵巢癌 A2780 细胞凋亡中的NF-κB（p65）蛋白及NF-κB（p65 Ser311）磷酸化蛋白的表达情况。

讨论

结论

参考文献

综述:细胞核因子-κB与卵巢癌关系的研究进展

攻读硕士学位期间完成、发表论文情况

致谢