EGCG经Notch1-Jagged1途径抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖

摘要

目的：鼻咽癌是东南亚及我国南方地区（如广东、湖南、广西和香港等）常见的恶性肿瘤之一。鼻咽癌干细胞在鼻咽癌的发生、发展、转移、耐药及对放化疗的敏感性等方面起十分重要的作用。本研究旨在初步分析表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在体外抑制鼻咽癌干细胞SP18增殖的机制。
　　方法：首先采用MTT法检测EGCG体外抑制鼻咽癌干细胞SP18增殖的半抑制浓度（IC50）；其次选用细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验及平皿克隆形成实验分析不同浓度EGCG（50.0 mg·L-1,100.0mg·L-1,150.0mg·L-1和200.0 mg·L-1)）对鼻咽癌干细胞SP18增殖的影响；再次利用流式细胞术（FCM）检测不同浓度EGCG（50.0 mg·L-1,100.0mg·L-1,150.0mg·L-1和200.0 mg·L-1)）对鼻咽癌干细胞SP18周期与凋亡的影响；然后采用RT-PCR和Western-blot检测不同浓度EGCG（50.0 mg·L-1,100.0mg·L-1,150.0mg·L-1和200.0 mg·L-1)）处理 SP18细胞后Notch1基因及蛋白的表达，最后运用 Western-blot检测不同浓度 EGCG（50.0 mg·L-1,100.0mg·L-1,150.0mg·L-1和200.0 mg·L-1)）处理SP18细胞后Jagged1蛋白表达。
　　结果：
　　1、EGCG体外抑制抑制鼻咽癌干细胞SP18生长增殖的IC50值为149.02 mg·L-1；
　　2、细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验及平皿克隆形成实验均显示，随着EGCG浓度不断升高和处理时间延长，对鼻咽癌干细胞SP18增殖的抑制作用逐渐增加（n=3，P<0.05）。
　　3、流式细胞术（FCM）结果显示，随着EGCG处理浓度的升高，鼻咽癌干细胞SP18中G1期细胞比例明显增加，而S期细胞比例减少，细胞的增殖指数降低，且细胞凋亡率升高（n=3，P<0.05）。
　　4、RT-PCR与Western-blot结果显示，鼻咽癌干细胞 SP18中Notch1基因与蛋白表达随着EGCG处理浓度的升高而逐渐降低。
　　5、鼻咽癌干细胞SP18中Jagged1蛋白的表达随EGCG处理浓度的升高也逐渐降低。
　　结论：
　　1、EGCG体外呈浓度依赖性降低鼻咽癌干细胞 SP18的增殖指数而抑制细胞的增殖。
　　2、EGCG通过降低鼻咽癌干细胞SP18中Notch1和Jagged1蛋白的表达，发挥其抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖。

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