基于核酸适体构象开关的8-羟基脱氧鸟苷检测新方法研究

摘要

8-羟基脱氧鸟苷是氧化应激过程中，羟自由基攻击DNA形成的一种DNA氧化损伤产物，可诱导突变、碱基错配等。研究发现它与机体的衰老、癌症的发生和环境污染物等有一定的相关性，是目前国际公认的DNA氧化损伤生物标志物。建立简便、灵敏、选择性好的8-OHdG定量检测方法，对研究癌症发生、衰老机制等具有重要意义。
　　第二章，建立了一种灵敏度高、特异性强、成本低的比色传感法。本法以未修饰的金纳米粒子为指示探针，未修饰的核酸适体为特异性识别分子，检测人体尿液中8-OHdG。在8-OHdG存在的情况下，Apt构象发生变化，由不规则螺旋结构形成 G-四分体结构，致使体系颜色发生改变，并且与8-OHdG浓度在5.60×10-9~2.82×10-7 mol·L-1范围内呈良好的线性关系，检出限为1.68×10-9 mol·L-1，相对标准偏差为1.12％~4.19%(n=6)，加标回收率在95.9%~104.9%之间。新建方法无需任何仪器，可对样品直接目测分析。
　　第三章，建立了一种基于金纳米粒子的共振光散射法检测尿中8-OHdG的方法。在高盐溶液中8-OHdG与Apt结合后，金纳米粒子共振光散射强度增加，并且8-OHdG浓度在9.08×10-11~1.41×10-8 mol·L-1范围内，与溶液共振光散射强度之间存在良好的线性关系，线性回归方程为ΔIRLS=10.7+12.7c(×10-9 mol·L-1)，检出限为2.73×10-11 mol·L-1，本方法精密度较好，相对标准偏差在1.63%~3.46%(n=6)之间，已用于实际样品检测，结果满意。
　　第四章，建立了一种金纳米粒子分光光度法测定尿8-羟基脱氧鸟苷的方法，在pH为3.5的BR缓冲溶液中，8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)与金纳米粒子作用，导致溶液吸光度比值改变，且在4.98×10-7 mol·L-1~1.27×10-5 mol·L-1范围内，吸光度值改变与8-OHdG的浓度呈良好的线性关系，其回归方程为：Δ(A630/A520)=–0.00713+0.0812c(×10-6 mol·L-1)，相关系数 r=0.9984，检出限为1.50×10-7 mol·L-1，相对标准偏差(RSD)在1.48%~3.57%。用于尿中8-OHdG的测定，回收率在96.1%~98.0%。该方法简单、快速、成本低。

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第一章 绪 论

1 8-羟基脱氧鸟苷及其生物学意义

2 8-羟基脱氧鸟苷检测方法概述及发展趋势

3 核酸适体

4 金纳米-功能化核酸比色传感原理

5 共振光散射及其定量原理

6 课题构思及主要研究内容

第二章 金纳米-核酸适体开关比色法测定8-羟基脱氧鸟苷

1 引言

2 材料与方法

3 结果与讨论

4 结论

第三章 金纳米-核酸适体开关共振光散射法测定

1 引言

2 材料与方法

3 结果与讨论

4 结论

第四章 金纳米分光光度法测定尿中8-羟基脱氧鸟苷

1 引言

2 实验部分

3 结果与讨论

4 结论

参考文献

综述

已/待发表的论文

致谢