主动外排泵AdeFGH与鲍曼不动杆菌多重耐药的相关性研究

摘要

目的：了解60株鲍曼不动杆菌临床分离株的临床分布及耐药情况，并探讨主动外排系统基因adeF、adeG、adeH在鲍曼不动杆菌中的分布及其mRNA表达水平与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系，从而为指导临床合理使用抗生素、减少耐药菌株的产生和传播以及为新型抗菌药物的研发提供理论依据。
　　方法：收集不同科室的痰标本、伤口分泌物标本和其他类型标本，采用平板分离技术进行鲍曼不动杆菌的分离，经BD CRYSTAL细菌鉴定系统进行菌种确定，采用法国生物梅里埃ATB药敏板对临床分离的60株鲍曼不动杆菌进行20种药物的药敏检测，然后进行统计分析；在GenBank上查找鲍曼不动杆菌的adeF、adeG、adeH基因序列，应用 Lasergene8.1.3软件设计引物，运用聚合酶链扩增（Polymerase chain reaction, PCR）技术检测外排泵基因adeF、adeG、adeH在收集到的鲍曼不动杆菌临床株中的分布情况，运用荧光定量 PCR（Real Time PCR,RT-PCR)技术检测收集到的鲍曼不动杆菌临床株中外排泵基因 adeF、adeG、adeH的mRNA表达水平，综合分析其与鲍曼不动杆菌多重耐药性的关系。
　　结果：
　　1、60株鲍曼不动杆菌标本主要来自ICU（占46.7％），神经外科（占15%）等临床科室；标本分布主要为痰标本（占78.3%），其次伤口分泌物标本（占11.7%），其它类型标本占10%；60株鲍曼不动杆菌根据药敏结果分为三组：A组（全耐药）24株（40%），B组（氨基糖苷类和复方新诺明敏感，其他抗生素耐药）26株（43.3%），C组（耐阿莫西林和一、二代头孢菌素类抗菌药物，其他抗生素敏感）10株（16.7%）。
　　2、泛耐药株（A组）和多重耐药株（B组）中均有adeF、adeG、adeH三个基因；相对敏感株（C组）中只有adeF、adeG、adeH基因中的一个或两个，其中，均有adeG基因，存在adeH基因的有3株，存在adeF基因的有2株。该组未检出adeF、adeG、adeH三个基因同时存在的菌株，说明adeF、adeG、adeH三个基因同时存在可能与鲍曼不动杆菌多重耐药有关。
　　3、adeF和adeG基因的mRNA的表达水平在抗菌谱A、B、C三组之间无明显差异；adeH基因的mRNA表达水平在A组和B组之间无明显差异(p>0.05），在A组和C组以及B组和C组之间有显著差异(p<0.05），但C组有部分菌株的adeH基因mRNA表达水平较高，说明鲍曼不动杆菌外排泵AdeFGH发挥外排作用可能需要adeF、adeG、adeH三个基因同时表达。
　　结论：
　　1.目前衡阳地区鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药现象严重，且大部分属于多重耐药株或泛耐药株；
　　2.衡阳地区鲍曼不动杆菌多重耐药可能与主动外排泵AdeFGH相关；
　　3.衡阳地区鲍曼不动杆菌多重耐药可能与adeF、adeG、adeH三个基因的共同存在和共同表达有关。

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前言

第一部分 鲍曼不动杆菌的临床分布及耐药现状

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第二部分 鲍曼不动杆菌主动外排系统基因adeF、adeG、adeH的PCR检测

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

第三部分 鲍曼不动杆菌主动外排系统基因adeF、adeG、adeH的mRNA表达研究

1 材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

结论

参考文献

综述

附录

致谢