二烯丙基二硫对大鼠肝星状细胞细胞外基质合成及TGF-β1/Smad信号通路的影响

摘要

目的:研究二烯丙基二硫（DADS）对大鼠肝星状细胞 HSC-T6的细胞外基质合成的影响以及对TGF-β1/Smad信号通路的影响。
　　方法:(1)将已激活的大鼠肝星状细胞 HSC-T6随机平均分为5组：溶媒对照组（A）、DADS不同浓度干预组（B:20mg/L、C:40 mg/L、D:80 mg/L）、2.5×10-7M秋水仙碱组(E)；
　　(2)酶联免疫吸附法（Elisa）检测细胞外基质主要组成成分Ⅰ型胶原(ColⅠ)及透明质酸(HA)的表达。
　　(3)通过 RT-PCR法、Western blot法分别从转录及蛋白水平对TGF-β1/Smad信号通路中相关蛋白TGF-β1、Smad3、pSmad3及Smad7的表达进行检测。
　　结果:（1）DADS能抑制大鼠肝星状细胞细胞外基质（extracellular matrixc， ECM）Ⅰ型胶原(ColⅠ)及透明质酸(HA)的合成，且呈现出浓度依赖效应。Elisa结果显示 DADS（20mg/L、40 mg/L、80 mg/L）、秋水仙碱分别作用于HSC-T6细胞48h后，与溶媒对照组相比， ColⅠ及 HA合成均明显减少（P<0.05），差异有显著性。
　　（2）RT-PCR结果显示：TGF-β1 mRNA表达40 mg/L组、80 mg/L组、秋水仙碱组与溶媒对照组相比明显减少（P<0.05），差异有显著性，80 mg/L组减少最为明显；20 mg/L组较溶媒对照组差异无统计学意义（P>0.05）；Smad3 mRNA表达各组比较差异无统计学意义（P>0.05）。
　　（3）Western blot结果显示：TGF-β1蛋白、pSmad3蛋白表达40mg/L组、80 mg/L组、秋水仙碱组与溶媒对照组相比均明显减少，差异有统计学意义（P<0.05），80 mg/L组蛋白表达下降最为明显，20 mg/L组较溶媒对照组差异无统计学意义（P>0.05）；Smad3蛋白表达各组比较差异无统计学意义（P>0.05）;Smad7蛋白表达40 mg/L组、80 mg/L组、秋水仙碱组与溶媒对照组相比明显增多，差异有统计学意义（P<0.05），80 mg/L组增多最明显，20 mg/L组较溶媒对照组无明显差异，P>0.05。
　　结论:在本实验条件下，DADS呈浓度依赖性的抑制 HSC-T6细胞的细胞外基质，其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路有关，通过减少 TGF-β1的表达，促进Smad7的表达，抑制Smad3的磷酸化实现。

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